 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2202 | 回復(fù): 11 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
rebornpro鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR產(chǎn)生非特異性帶
|
||
|
RT，最近PCR摸索條件，引物單子上寫的退火溫度是45°（好低�。�，這個(gè)是45°退火P出來的圖，MARKER是DL2000，很奇怪，PCR產(chǎn)物的理論值應(yīng)該是900多的樣子（上面那個(gè)不亮的帶），結(jié)果產(chǎn)物只有500的樣子。現(xiàn)在不管產(chǎn)物大小了，就把那個(gè)不亮的當(dāng)非特異性帶吧。如何改進(jìn)PCR條件把這個(gè)非特異性帶給它去掉。求人解答。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有130人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 急求解！Pcr循環(huán)數(shù)問題...
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 急救��！各位大蝦，PCR擴(kuò)基因有雜帶(有圖)！
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 連接后轉(zhuǎn)化子PCR出現(xiàn)非特異性的條帶
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 連接轉(zhuǎn)化后菌落PCR驗(yàn)證出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】幾個(gè)關(guān)于實(shí)時(shí)定量PCR的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR后沒有目的條帶，有非特異性條帶，求解決辦法？？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】真菌分子鑒定問題
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】菌落PCR問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【分享】提高PCR特異性的方法
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)指南（一）
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【專題】PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)指南
已經(jīng)有535人回復(fù)
rebornpro
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.5
- 帖子: 30
- 在線: 30.6小時(shí)
- 蟲號: 1359714
- 注冊: 2011-08-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
9樓2012-05-10 11:16:12
cheng_xiao
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 59 (初中生)
- 金幣: 3645.2
- 帖子: 273
- 在線: 62.7小時(shí)
- 蟲號: 1553648
- 注冊: 2011-12-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-05-10 11:27:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-05-10 11:27:57
| 看你的圖片一個(gè)是膠制作的不好或者你的電泳儀器不好，把條帶都跑歪了�？茨愕牡膱D改進(jìn)PCR條件效果應(yīng)該不佳，因?yàn)槟愕姆翘禺愋詶l帶比特異性條帶亮的多，說明你引物在另一片段結(jié)合的趨勢比期望位置更好，所以你提高PCR溫度反而致使你的特異性條帶沒有了，所以建議你另設(shè)計(jì)引物，你也可以做個(gè)反向pcr或者RACE之類的，實(shí)驗(yàn)順利啊 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
rebornpro
2樓2012-05-10 09:54:12
xiaoxiong520
銀蟲 (初入文壇)
- MolEPI: 4
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 463.4
- 帖子: 49
- 在線: 19.3小時(shí)
- 蟲號: 1400961
- 注冊: 2011-09-14
- 性別: MM
- 專業(yè): 觀賞園藝學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, good! 2012-05-10 11:27:36
rebornpro: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-05-10 17:22:28
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, good! 2012-05-10 11:27:36
rebornpro: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-05-10 17:22:28
|
1、引物的特異性較差。這種情況下，可能會(huì)出現(xiàn)很難消除的非特異性擴(kuò)增；如果模板好的話，多半會(huì)有目的片斷出現(xiàn)。 2、模板不好。比如，RNA提取得不好，里面有基因組DNA污染或RNA降解比較嚴(yán)重，最終導(dǎo)致cDNA的質(zhì)量不好。 3、Taq酶出現(xiàn)了問題。保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致活性改變，從而容易擴(kuò)出非特異性條帶； 若確定引物設(shè)計(jì)沒有問題，以及模板的純化外，Mg2+濃度過高也會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增的。還有一個(gè)問題就是 可能你的目的基因GC含量比較高，這個(gè)可以用軟件分析一下，如果GC含量高或者有復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)，普通的Taq很難擴(kuò)增出目的基因。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2012-05-10 10:17:25
孫啟亮
金蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 121 (高中生)
- 貴賓: 0.216
- 金幣: 2881.3
- 散金: 2546
- 紅花: 23
- 沙發(fā): 19
- 帖子: 2792
- 在線: 677.4小時(shí)
- 蟲號: 1112263
- 注冊: 2010-10-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 前寒武紀(jì)地質(zhì)學(xué)
4樓2012-05-10 10:30:49
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +5 | 匹克i 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 361求調(diào)劑 +3 | Glack 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +8 | z1z2z3879 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +5 | 葵梓衛(wèi)隊(duì) 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 306求調(diào)劑 +9 | chuanzhu川燭 2026-03-18 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿211 +3 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 來好運(yùn)來來來 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 妮妮ninicgb 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +4 | @taotao 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|