 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5431 | 回復(fù): 13 | |||||||
shiliu2011木蟲 (正式寫手)
|
[交流]
PCR緩沖液（PCr Buffer） 已有12人參與
|
||||||
從網(wǎng)上看到的，很不錯(cuò)，發(fā)到這里和大家一起學(xué)習(xí)咯！ 用于PCR的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液見PCR操作范例。于72℃時(shí)，反應(yīng)體系的pH值將下降1個(gè)單位，接近于7.2。二價(jià)陽離子的存在至關(guān)重要，影響PCR的特異性和產(chǎn)量。實(shí)驗(yàn)表明，Mg2+優(yōu)于Mn2+，而Ca2+無任何作用。 1．Mg2+濃度Mg2+的最佳濃度為1.5mmol/L(當(dāng)各種dNTP濃度為200mmol/L時(shí))，但并非對(duì)任何一種模板與引物的結(jié)合都是最佳的。首次使用靶序列和引物結(jié)合時(shí)，都要把Mg2+濃度調(diào)到最佳，其濃度變化范圍為1～10mmol/L。Mg2+過量易生成非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，Mg2+不足易使產(chǎn)量降低。 樣品中存在的較高濃度的螯合劑如EDTA或高濃度帶負(fù)電荷的離子基團(tuán)如磷酸根，會(huì)與Mg2+結(jié)合而降低Mg2+有效濃度。因此，用作模板的DNA應(yīng)溶于10mmol/l Tris-HCl(pH7.6)0.1mmol/L EDTA中。 dNTP含有磷酸根，其濃度變化將影響Mg2+的有效濃度。標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系中4×dTNPs的總濃度為0.8mmol/L，低于1.5mmol/L的Mg2+濃度。因此，在高濃度DNA及dNTP條件時(shí)，必須相應(yīng)調(diào)整Mg2+的濃度。 2．Tris -HCl緩沖液在PCR中使用10～50mmol/L的Tris –HCl緩沖液，很少使用其他類型的緩沖液。Tris緩沖液是一種雙極化的離子緩沖液，pKa為8.3(20℃),△pKa為0.021/℃。因此，20mmol/l Tris pH8.3(20℃)時(shí)，在典型的熱循環(huán)條件下，真正的pH值在7.8～6.8之間。 3．KCl濃度K+濃度在50mmol/L 時(shí)能促進(jìn)引物退火。但現(xiàn)在的研究表明，NaCl濃度在50mmol/L時(shí)，KCl濃度高于50mmol/L將會(huì)抑制Taq酶的活性，少加或不加KCl對(duì)PCR結(jié)果沒有太大影響。 4．明膠明膠和BSA或非離子型去垢劑具有穩(wěn)定酶的作用。一般用量為100μg/ml，但現(xiàn)在的研究表明，加或不加都能得到良好和PCR結(jié)果，影響不大。 5．二甲基亞砜（DMSO） 在使用Klenow片段進(jìn)行PCR時(shí)DMSO是有用的；加入10%DM－SO有利于減少DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，使（G+C）%含量高的模板易于完全變性，在反應(yīng)體系中加入DMSO使PCR產(chǎn)物直接測(cè)序更易進(jìn)行，但超過10%時(shí)會(huì)抑制Taq DNA聚合酶的活性，因此，大多數(shù)并不使用DMSO。 6．甘油：保護(hù)Taq酶，增加酶的穩(wěn)定性，以提高產(chǎn)量   歡迎補(bǔ)充！ [ Last edited by shiliu2011 on 2012-6-4 at 19:41 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | PCR技術(shù) | 基因工程、分子技術(shù)、微生物理論 | 蛋白表達(dá)純化鑒定精華 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有108人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 一種比較詳細(xì)的PCR技術(shù)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR標(biāo)準(zhǔn)體系有關(guān)問題。。求高手解答
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 求助:TAKARA 10*PCR 緩沖液的配制!
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 求助:TAKARA 10*PCR 緩沖液的配制!
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 兩種引物的PCR電泳圖，做了多次還是不解
已經(jīng)有18人回復(fù)
- PCR 總是呈現(xiàn)涂抹狀 求解答！
已經(jīng)有39人回復(fù)
- 做一個(gè)克隆所需的最短時(shí)間？比比誰更高效快速！
已經(jīng)有39人回復(fù)
- PCR-SSCP 顯色條帶淺是什么原因？謝謝
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【分享】熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)指南（二）
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】酵母菌落PCR
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR條帶不清楚
已經(jīng)有11人回復(fù)
q317476148
鐵桿木蟲 (著名寫手)
喵星人
- 應(yīng)助: 157 (高中生)
- 貴賓: 0.011
- 金幣: 6055.6
- 散金: 1865
- 紅花: 46
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1967
- 在線: 2525.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1559925
- 注冊(cè): 2012-01-02
- 性別: MM
- 專業(yè): 藥物化學(xué)
9樓2012-12-29 12:51:04
2樓2012-06-05 08:57:17
3樓2012-07-31 23:02:33
shiliu2011
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 35 (小學(xué)生)
- 金幣: 3699
- 散金: 103
- 紅花: 3
- 帖子: 619
- 在線: 71.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1377080
- 注冊(cè): 2011-08-23
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
4樓2012-08-02 01:13:35
cll881125
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 38.3
- 帖子: 16
- 在線: 11.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1801285
- 注冊(cè): 2012-05-07
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2012-08-02 12:26:14
丫丫2012
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 帖子: 5
- 在線: 2小時(shí)
- 蟲號(hào): 2047267
- 注冊(cè): 2012-10-07
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
謝謝分享，一起學(xué)習(xí) 6樓2012-10-09 20:03:18
zhuimeng305
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 11580
- 帖子: 522
- 在線: 64.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1124279
- 注冊(cè): 2010-10-16
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
7樓2012-12-28 21:06:10
 感謝分享！！ |
8樓2012-12-29 09:15:31
 |
10樓2013-01-24 01:06:50
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 shiliu2011 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +7 | 勒布朗@ 2026-03-31 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿西交大080500材料學(xué)碩349 +6 | jqx1258 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 好好讀書。 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)279求調(diào)劑 +9 | 哈哈哈^_^ 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | 篤行致遠(yuǎn). 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研材料工程351分調(diào)劑 +4 | 整個(gè)好的 2026-03-31 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 張芳銘-中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-環(huán)境工程專碩-298 +9 | 手機(jī)用戶 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 085600，321分求調(diào)劑 +7 | 大饞小子 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 367求調(diào)劑 +7 | 芋泥啵�！� 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +7 | Trying] 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +17 | land xuxu 2026-03-26 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +6 | xiao愛同學(xué) 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0817化工學(xué)碩調(diào)劑 +7 | 努力上岸中！ 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 323分 食品與營養(yǎng)調(diào)劑 +3 | 嘿ooo 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 370求調(diào)劑 +3 | 080700調(diào)劑 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +16 | 李李不服輸 2026-03-26 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | wei-5 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|