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windleakey金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
畢赤酵母轉(zhuǎn)化的問(wèn)題
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| 我最近做的一次酵母的電擊轉(zhuǎn)化，畢赤酵母GS115，1.5kv電擊涂MD板子，3天多左右長(zhǎng)出白色的小菌落，特別多特別密，形態(tài)很像早期的酵母菌落，但沒(méi)平時(shí)轉(zhuǎn)化的酵母大，我很懷疑是不是我要的菌，等了一天多，發(fā)現(xiàn)菌落不長(zhǎng)大，但數(shù)量更多了，請(qǐng)問(wèn)大家這到底是個(gè)啥啊?有沒(méi)有有經(jīng)驗(yàn)的大神。。。謝謝了 |
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reallpf
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 個(gè)人認(rèn)為，應(yīng)該是染菌了，當(dāng)然也有例外，有時(shí)候酵母會(huì)長(zhǎng)很慢。我轉(zhuǎn)化畢赤酵母一般1天半的時(shí)候能看出明顯的菌落，2天就基本長(zhǎng)好了。所以從常規(guī)來(lái)講3天才出現(xiàn)就是染菌了。不過(guò)如果你做的是敲除酵母的基因，那就有可能會(huì)減慢很多。 |
windleakey2樓2012-07-16 10:52:09
windleakey
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3樓2012-07-16 12:12:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)，謝謝交流哦~~~ 2012-07-16 12:22:32
scelab: 金幣+5, MicEPI+1, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)，謝謝交流哦~~~ 2012-07-16 12:22:32
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轉(zhuǎn)化比較簡(jiǎn)單，線(xiàn)性化DNA加入感受態(tài)（一般2ug加入80uL感受態(tài)），冰浴5min，電擊，加1mL冰預(yù)冷1 M山梨醇，取400uL涂MD板；如果是抗性板要復(fù)蘇1h再涂板。 我在資源帖上傳了一篇文獻(xiàn)，關(guān)于提高畢赤酵母轉(zhuǎn)化效率的，你可以看看。我大多使用這種現(xiàn)做現(xiàn)用的感受態(tài)。 |
4樓2012-07-16 12:17:55
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