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關(guān)于酶切表達(dá)載體的問題
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各位大俠： 表達(dá)載體是4547堿基，其上的兩個酶切位點之間相差40個堿基，本來是應(yīng)該切掉這40個堿基，，可是每次切都有1000處有一條帶 然后還有一個4000多的條帶 載體是老板給的 圖譜是從一篇文獻(xiàn)上找的 根據(jù)圖譜設(shè)計的酶切位點 能不能大家?guī)兔Ψ治鲆幌略? |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵積極交流經(jīng)驗 2012-09-05 14:00:10
小丹木木: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵積極交流經(jīng)驗 2012-09-05 14:00:10
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大阪市由于該載體資料不全，導(dǎo)致你對載體酶切位點分析有誤造成的，你所用的酶切位點在載體上應(yīng)該有兩個，建議這樣： 1 在谷歌上輸入該載體的全名，后面一個空格輸入sequence一般都能查到商品化載體序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物學(xué)軟件分析酶切位點，全面檢查一下是否有重復(fù)的酶切位點。 2 考慮內(nèi)切酶的污染和質(zhì)量，如果你們實驗室的內(nèi)切酶是公用的，就要考慮是否別人在做雙酶切的時候污染了其他內(nèi)切酶，導(dǎo)致酶切條帶有誤，另外內(nèi)切酶牌子的選擇也是有講究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至沒有，MBI和TAKARA的就要選擇好BUFFER，否則時間長會有星活性，但是就你的實驗來看，星活性概率不大，畢竟酶切時間很短。 一般你這種情況就是上述兩種可能，一一排除吧。 |
7樓2012-09-05 11:06:28
8樓2012-09-05 16:22:27
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