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關(guān)于酶切表達(dá)載體的問(wèn)題
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各位大俠： 表達(dá)載體是4547堿基，其上的兩個(gè)酶切位點(diǎn)之間相差40個(gè)堿基，本來(lái)是應(yīng)該切掉這40個(gè)堿基，，可是每次切都有1000處有一條帶 然后還有一個(gè)4000多的條帶 載體是老板給的 圖譜是從一篇文獻(xiàn)上找的 根據(jù)圖譜設(shè)計(jì)的酶切位點(diǎn) 能不能大家?guī)兔Ψ治鲆幌略? |
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4樓2012-08-21 10:38:34
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-09-05 14:00:10
小丹木木: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2012-09-05 14:00:10
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大阪市由于該載體資料不全，導(dǎo)致你對(duì)載體酶切位點(diǎn)分析有誤造成的，你所用的酶切位點(diǎn)在載體上應(yīng)該有兩個(gè)，建議這樣： 1 在谷歌上輸入該載體的全名，后面一個(gè)空格輸入sequence一般都能查到商品化載體序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物學(xué)軟件分析酶切位點(diǎn)，全面檢查一下是否有重復(fù)的酶切位點(diǎn)。 2 考慮內(nèi)切酶的污染和質(zhì)量，如果你們實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)切酶是公用的，就要考慮是否別人在做雙酶切的時(shí)候污染了其他內(nèi)切酶，導(dǎo)致酶切條帶有誤，另外內(nèi)切酶牌子的選擇也是有講究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至沒(méi)有，MBI和TAKARA的就要選擇好BUFFER，否則時(shí)間長(zhǎng)會(huì)有星活性，但是就你的實(shí)驗(yàn)來(lái)看，星活性概率不大，畢竟酶切時(shí)間很短。 一般你這種情況就是上述兩種可能，一一排除吧。 |
7樓2012-09-05 11:06:28
8樓2012-09-05 16:22:27
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