 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1751 | 回復(fù): 5 | ||
wanghx_2012銀蟲 (小有名氣)
|
[求助]
載體和酶切片段連接的問題
|
| 各位朋友,我現(xiàn)在在做重組質(zhì)粒,用的是PHT304,想要在接頭區(qū)連接一個(gè)Cry3a的啟動(dòng)子,現(xiàn)在我在啟動(dòng)子的上下油分別加了Pst1和Xba1的酶切位點(diǎn).我用雙酶切了T載體和304之后割膠回收了對應(yīng)大小的片段,然后T4連接過夜轉(zhuǎn)化DH5a,挑抗性平板上長的單菌落做PCR時(shí)可以看到微弱的1000bp的條帶但是提質(zhì)粒提出來的DNA遠(yuǎn)大于重組質(zhì)粒理論大小.酶切的時(shí)候也看不到目標(biāo)條帶.我懷疑是不是有這樣的情況:我的啟動(dòng)子自我連接了,然后這個(gè)連接體被接到了切開的304上.或則各位朋友有沒有什么好的建議.多謝!~ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有146人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助：Xho 1 單酶切 載體連接
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 關(guān)于酶切后的連接問題，共同探討共同進(jìn)步
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有30人回復(fù)
- T載體酶切片段與目的片段大小不一致
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 目的片段與表達(dá)載體的連接
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 連接酶切問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR ， 雙酶切，連接問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助】基因克隆T載體酶切問題等
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 酶切的相關(guān)問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 雙酶切連接表達(dá)載體，兩個(gè)月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點(diǎn)
已經(jīng)有52人回復(fù)
- 為什么我做的酶切連接總是不長斑呢？
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 【求助/交流】超大片段連接問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
2樓2012-08-22 11:56:37
sd3824289
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 47 (小學(xué)生)
- 金幣: 2304.1
- 散金: 33
- 帖子: 740
- 在線: 105.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1657712
- 注冊: 2012-03-02
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2012-08-24 10:20:08
mgangle
鐵桿木蟲 (著名寫手)
樂樂家族-----樂顛顛
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 9313.9
- 散金: 200
- 沙發(fā): 1
- 帖子: 2567
- 在線: 475.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 512931
- 注冊: 2008-02-27
- 專業(yè): 植物病理學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
wanghx_2012: 金幣+2, ★有幫助 2012-08-24 20:52:44
wanghx_2012: 金幣+2, ★有幫助 2012-08-24 20:52:44
|
1.PCR擴(kuò)增有弱條帶，但是酶切卻沒有，原因很可能是沒有連接到304載體，因?yàn)榫銹CR有時(shí)候也會(huì)出現(xiàn)假陽性，我們可以簡單理解為目的片段只是附著在菌落表面，所以PCR擴(kuò)增是可以的，但是一旦搖成菌液再PCR檢測，可能連弱帶也沒有了，樓主實(shí)在不放心，簡單的方法是送去測序就知道有沒有連接上了！ 2.質(zhì)粒與預(yù)測大小不一致，質(zhì)粒正常提取一般會(huì)有螺旋，環(huán)狀等結(jié)構(gòu)，質(zhì)粒條帶的位置變化和這些結(jié)構(gòu)也有一定關(guān)系，不能完全說明什么問題！ 所以最簡單的方法送去測序，一般一個(gè)反應(yīng)也就25元左右，與酶切花費(fèi)差不多。 |
4樓2012-08-24 16:25:34
wanghx_2012
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 377
- 散金: 3
- 紅花: 1
- 帖子: 106
- 在線: 9.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1751313
- 注冊: 2012-04-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2012-08-24 20:52:04
 |
6樓2012-08-25 23:09:23
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wanghx_2012 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +3 | 簡單點(diǎn)0 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | △小透明* 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +9 | 負(fù)心者當(dāng)誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
[考研] 085601求調(diào)劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程327求調(diào)劑 +3 | xiaohe12w 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 337一志愿華南理工0805材料求調(diào)劑 +7 | mysdl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 18880831720 2026-03-11 | 7/350 |
|