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weiyasong木蟲 (著名寫手)
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[求助]
大家好，幫忙看看PCR結(jié)果吧？謝謝！��！
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大家好，昨天跑的PCR結(jié)果： 1、第3條帶大約是多少�。� 2、第4條帶的目的片段是187bp，有目的條帶，但不是太清楚，而且引物很亮，這是怎么回事��？PCR反應(yīng)程序是94℃4min，94℃30s-56℃45s-72℃30s---30個循環(huán)，72℃5min 還請高人指教，小弟將不勝感激！謝謝�。。� 112.jpg |
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7樓2012-09-11 13:30:42
weekend883
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2樓2012-09-10 21:46:59
weiyasong
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3樓2012-09-10 21:53:12
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對于問題一：建議參照marker條帶位置（看一下marker的說明書，應(yīng)該會有對應(yīng)的每條帶長度說明的），以及你設(shè)計(jì)時候的預(yù)期擴(kuò)增片段長度，結(jié)合起來可以估計(jì)出第三條帶的大小。 對于問題二：應(yīng)該是你擴(kuò)增的條件設(shè)置不夠理想，導(dǎo)致引物二聚體嚴(yán)重。建議提高退火問題，或者是用touchdown（二階段溫度法）的方法（對于上下游引物TM值相差較大的情況）重新擴(kuò)增，擴(kuò)增結(jié)果應(yīng)該會有改善。 |
4樓2012-09-10 22:02:33
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