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yanbingkun79新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
蛋白表達(dá)問(wèn)題
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本人做一個(gè)大腸桿菌本身酶蛋白的外源表達(dá)，具體如下： 將大腸這個(gè)目的片段在ecogene中查出，然后設(shè)計(jì)引物PCR，連到pMD-18T上，轉(zhuǎn)錄DH5α中，酶切驗(yàn)證測(cè)序全部正確；在連接到pET-28a上，轉(zhuǎn)錄BL21（DE3）中，酶切驗(yàn)證測(cè)序也全部正確。5-30mM IPTG誘導(dǎo)，20℃、30℃、37℃溫度梯度也都設(shè)了，還換了宿主細(xì)胞Rosetta中，還是不表達(dá)。后來(lái)?yè)Q用別人的pET-28a中，也轉(zhuǎn)到BL、rosetta中，表達(dá)了一丁丁點(diǎn)點(diǎn)，懇求各位大俠，有什么建設(shè)性的建議？糾結(jié)死了，做了一個(gè)多月了，就是不表達(dá)！�。。� [ Last edited by 1949stone on 2012-12-14 at 13:06 ] |
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yanbingkun79
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yanbingkun79
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