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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 蛋白表達問題
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yanbingkun79新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白表達問題
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本人做一個大腸桿菌本身酶蛋白的外源表達，具體如下： 將大腸這個目的片段在ecogene中查出，然后設(shè)計引物PCR，連到pMD-18T上，轉(zhuǎn)錄DH5α中，酶切驗證測序全部正確；在連接到pET-28a上，轉(zhuǎn)錄BL21（DE3）中，酶切驗證測序也全部正確。5-30mM IPTG誘導，20℃、30℃、37℃溫度梯度也都設(shè)了，還換了宿主細胞Rosetta中，還是不表達。后來換用別人的pET-28a中，也轉(zhuǎn)到BL、rosetta中，表達了一丁丁點點，懇求各位大俠，有什么建設(shè)性的建議？糾結(jié)死了，做了一個多月了，就是不表達�。。�！ [ Last edited by 1949stone on 2012-12-14 at 13:06 ] |
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10樓2012-12-15 13:00:07
gyesang
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2樓2012-12-13 23:07:40
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3樓2012-12-13 23:34:59
轉(zhuǎn)基因猴子
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4樓2012-12-14 10:31:45
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