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liuwei0824新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于平末端連接 已有3人參與
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大家好！我最近在做平末端連接的實(shí)驗(yàn)，總是做不成功，求教~~ 載體是用smal1酶切的平末端，片段是雙酶切的粘性末端，酶切后，載體進(jìn)行去磷酸化，片段進(jìn)行末端補(bǔ)平，然后進(jìn)行連接反應(yīng)（16℃過(guò)夜），然后轉(zhuǎn)化，平板上都不長(zhǎng)菌。。。。 一開(kāi)始載體是在30度酶切2h，片段在37度酶切2h，跑電泳后發(fā)現(xiàn)，載體只是部分被切開(kāi)了，然后酶切時(shí)間就改成了過(guò)夜，結(jié)果都切沒(méi)了，，， 所有的酶都用的是Takara公司的。 求高人指點(diǎn)�。。。≈x謝啦O(∩_∩)O~ |
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liuwei0824
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2012-12-21 16:15:17
zhaodahe
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2樓2012-12-18 12:23:31
zhaodahe
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4樓2012-12-24 12:35:12
【答案】應(yīng)助回帖
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可以試試這篇論文的方法，雖然是個(gè)小的改進(jìn)，但是值得一試，而且很方便： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 |
5樓2014-03-25 19:07:03
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