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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 融合表達蛋白酶的表達
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[交流]
融合表達蛋白酶的表達
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| 大家好 我現在在研究融合肽的性質 由于研究的抗菌肽太小 導師讓我在它前面連接了表皮生長因子基因 表皮生長因子和抗菌肽之間連接凝血酶識別位點基因（因為考慮腸激酶切割效率問題 不打算用腸激酶） 現在的問題是要在表皮生長因子前面加一個既不會產生多余殘基切割效率又高的蛋白酶序列 目的是表達后切掉his標簽 查了資料感覺可以用TEV蛋白酶 但是切割后會有一個gly殘基 如果以后要做藥物開發(fā)就會有影響 有沒有蟲友對這方面比較了解 希望給出寶貴意見 感激不盡 |
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 【分子生物】EPI帖 | 蛋白質生物學 |
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11樓2012-12-31 21:44:27
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yiye1220(金幣+1): 謝謝參與
amisking: 金幣+4, MolEPI+1, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2012-12-31 22:25:11
yiye1220: 金幣+3 2013-01-01 13:23:20
yiye1220(金幣+1): 謝謝參與
amisking: 金幣+4, MolEPI+1, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2012-12-31 22:25:11
yiye1220: 金幣+3 2013-01-01 13:23:20
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http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2771223 http://wenku.baidu.com/view/58b176a4f524ccbff12184ae.html http://wenku.baidu.com/view/484ad0d484254b35eefd344c.html http://wenku.baidu.com/view/a892093767ec102de2bd89d5.html http://wenku.baidu.com/view/9a0f0b3083c4bb4cf7ecd1a0.html http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SPKX200919054.htm http://www.haodf.com/zhuanjiaguandian/liuhaitaodoctor_111177.htm http://www.doc88.com/p-676169837475.html 基質金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca++、Zn++等金屬離子作為輔助因子而得名，其家族成員具有相似的結構，一般由5個功能不同的結構域組成 :（1）疏水信號肽序列;（2）前肽區(qū)，主要作用是保持酶原的穩(wěn)定。當該區(qū)域被外源性酶切斷后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性區(qū)，有鋅離子結合位點，對酶催化作用的發(fā)揮至關重要;（4）富含脯氨酸的鉸鏈區(qū);（5）羧基末端區(qū)，與酶的底物特異性有關。其中酶催化活性區(qū)和前肽區(qū)具有高度保守性。MMPs成員上述結構的基礎上各有特點。各種MMP間具有一定的底物特異性，但不是絕對的。同一種MMP可降解多種細胞外基質成份，而某一種細胞外基質成分又可被多種MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。 MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障，在腫瘤侵襲轉移中起關鍵性作用，從而在腫瘤浸潤轉移中的作用日益受到重視，被認為是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP1～26。根據作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為4類。 Ⅳ型膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92kD，命名為MMP-9;另一種非糖化，分子量為72kD，被稱為MMP-2。當前對MMP-2，MMP-9的研究較深入。 MMP-2基因位于人類染色體16q21，由13個外顯子和12個內含子所組成，結構基因總長度為27kb，與其他金屬蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁側序列促進子區(qū)域含有2個GC盒而不是TATA盒�；罨腗MP-2定位于細胞穿透基質的突出部位，估計其在酶解細胞間基質成分及基底膜的主要成分Ⅳ型膠原中有“鉆頭”的作用。 此外，已證實MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型膠原及明膠。MMP-7能作用于明膠和FN。MMP-1的產生范圍較廣，可由基質纖維母細胞、巨噬細胞、內皮細胞、上皮細胞產生。正常情況下MMP-1陽性率很低，但在各種刺激下可高表達。有研究顯示惡性腫瘤中MMP-1高表達與預后相關。 MMPs的活性受到三個水平的調節(jié)，即基因轉錄水平，無活性酶前體經蛋白水解作用而激活以及特異性抑制因子（TIMP）的作用。 |
5樓2012-12-31 18:55:04
★ ★ ★ ★
yiye1220(金幣+1): 謝謝參與
yiye1220: 金幣+3 2013-01-01 13:23:34
yiye1220(金幣+1): 謝謝參與
yiye1220: 金幣+3 2013-01-01 13:23:34
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本帖內容被屏蔽 |
7樓2012-12-31 19:31:48
12樓2012-12-31 21:45:51
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