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[交流]
融合表達(dá)蛋白酶的表達(dá)
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| 大家好 我現(xiàn)在在研究融合肽的性質(zhì) 由于研究的抗菌肽太小 導(dǎo)師讓我在它前面連接了表皮生長因子基因 表皮生長因子和抗菌肽之間連接凝血酶識別位點基因（因為考慮腸激酶切割效率問題 不打算用腸激酶） 現(xiàn)在的問題是要在表皮生長因子前面加一個既不會產(chǎn)生多余殘基切割效率又高的蛋白酶序列 目的是表達(dá)后切掉his標(biāo)簽 查了資料感覺可以用TEV蛋白酶 但是切割后會有一個gly殘基 如果以后要做藥物開發(fā)就會有影響 有沒有蟲友對這方面比較了解 希望給出寶貴意見 感激不盡 |
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 【分子生物】EPI帖 | 蛋白質(zhì)生物學(xué) |
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7樓2012-12-31 19:31:48
userhung
禁蟲 (文學(xué)泰斗)
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http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2771223 http://wenku.baidu.com/view/58b176a4f524ccbff12184ae.html http://wenku.baidu.com/view/484ad0d484254b35eefd344c.html http://wenku.baidu.com/view/a892093767ec102de2bd89d5.html http://wenku.baidu.com/view/9a0f0b3083c4bb4cf7ecd1a0.html http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SPKX200919054.htm http://www.haodf.com/zhuanjiaguandian/liuhaitaodoctor_111177.htm http://www.doc88.com/p-676169837475.html 基質(zhì)金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca++、Zn++等金屬離子作為輔助因子而得名，其家族成員具有相似的結(jié)構(gòu)，一般由5個功能不同的結(jié)構(gòu)域組成 :（1）疏水信號肽序列;（2）前肽區(qū)，主要作用是保持酶原的穩(wěn)定。當(dāng)該區(qū)域被外源性酶切斷后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性區(qū)，有鋅離子結(jié)合位點，對酶催化作用的發(fā)揮至關(guān)重要;（4）富含脯氨酸的鉸鏈區(qū);（5）羧基末端區(qū)，與酶的底物特異性有關(guān)。其中酶催化活性區(qū)和前肽區(qū)具有高度保守性。MMPs成員上述結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上各有特點。各種MMP間具有一定的底物特異性，但不是絕對的。同一種MMP可降解多種細(xì)胞外基質(zhì)成份，而某一種細(xì)胞外基質(zhì)成分又可被多種MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。 MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用，從而在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用日益受到重視，被認(rèn)為是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性，將MMPs分為4類。 Ⅳ型膠原酶為其中重要的一類，它主要有兩種形式，一種被糖化，分子量為92kD，命名為MMP-9;另一種非糖化，分子量為72kD，被稱為MMP-2。當(dāng)前對MMP-2，MMP-9的研究較深入。 MMP-2基因位于人類染色體16q21，由13個外顯子和12個內(nèi)含子所組成，結(jié)構(gòu)基因總長度為27kb，與其他金屬蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁側(cè)序列促進(jìn)子區(qū)域含有2個GC盒而不是TATA盒�；罨腗MP-2定位于細(xì)胞穿透基質(zhì)的突出部位，估計其在酶解細(xì)胞間基質(zhì)成分及基底膜的主要成分Ⅳ型膠原中有“鉆頭”的作用。 此外，已證實MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型膠原及明膠。MMP-7能作用于明膠和FN。MMP-1的產(chǎn)生范圍較廣，可由基質(zhì)纖維母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞產(chǎn)生。正常情況下MMP-1陽性率很低，但在各種刺激下可高表達(dá)。有研究顯示惡性腫瘤中MMP-1高表達(dá)與預(yù)后相關(guān)。 MMPs的活性受到三個水平的調(diào)節(jié)，即基因轉(zhuǎn)錄水平，無活性酶前體經(jīng)蛋白水解作用而激活以及特異性抑制因子（TIMP）的作用。 |
5樓2012-12-31 18:55:04
11樓2012-12-31 21:44:27
kiss20085537
木蟲之王 (文學(xué)泰斗)
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12樓2012-12-31 21:45:51
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