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基因文庫的評價
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各位蟲友：我最近構(gòu)建了一個細菌的基因文庫，所選用的載體是PUC19（載體用BamH酶切），感受態(tài)細胞為DH5α，現(xiàn)在我正在對我的文庫進行評價。 我做了一下幾個方面的工作 1.計算克隆子數(shù)，根據(jù)計算公式，大于理論克隆子的數(shù)目。 2.隨機挑取10-20個克隆子，提取其質(zhì)粒，核酸電泳檢測其大小（理論應(yīng)大于空載體）。再對這些質(zhì)粒用BamH酶切，查看酶切后連入載體的基因片段大小是否在理論范圍內(nèi)）。 請問：這樣評價文庫，可以嗎？我看了很多人都在考察文庫的滴度，可是我這是一個很小的亞文庫，需要這樣評價嗎？ |
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gaojuan1985
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
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您好，我想咨詢你一下細菌基因文庫構(gòu)建的問題。 我的是一個革蘭氏陽性菌，基因組經(jīng)Sau 3AI不完全酶切后，與BamHI酶切并CIAP處理后的pUC19連接，然后轉(zhuǎn)化DH5a，但是我的轉(zhuǎn)化涂平板長得克隆很少。pUC19切之后跑膠回收條帶清晰，沒有彌散。感受態(tài)細胞驗證沒有問題，載體自連的話我用了56 ng pUC進行驗證，長了幾十個菌落。那么您認為是我的連接有問題還是轉(zhuǎn)化有問題呢？ 會不會是連接的量太少？我10ul的連接體系里面有30 ng的載體，150 ng左右的插入片段（2-5kb），16度16 h左右，然后全部涂板，但是只長了幾十個克隆，太郁悶了。 我想問一下，你的連接體系里面，pUC19和插入片段分別加了多少ng？連接了多久呢？ |
2樓2013-04-01 18:59:24
3樓2013-05-16 14:05:37
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