| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 677 | 回復(fù): 2 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖,點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
[求助]
基因文庫的評價
|
||
|
各位蟲友:我最近構(gòu)建了一個細菌的基因文庫,所選用的載體是PUC19(載體用BamH酶切),感受態(tài)細胞為DH5α,現(xiàn)在我正在對我的文庫進行評價。 我做了一下幾個方面的工作 1.計算克隆子數(shù),根據(jù)計算公式,大于理論克隆子的數(shù)目。 2.隨機挑取10-20個克隆子,提取其質(zhì)粒,核酸電泳檢測其大小(理論應(yīng)大于空載體)。再對這些質(zhì)粒用BamH酶切,查看酶切后連入載體的基因片段大小是否在理論范圍內(nèi))。 請問:這樣評價文庫,可以嗎?我看了很多人都在考察文庫的滴度,可是我這是一個很小的亞文庫,需要這樣評價嗎? |


新蟲 (正式寫手)
|
您好,我想咨詢你一下細菌基因文庫構(gòu)建的問題。 我的是一個革蘭氏陽性菌,基因組經(jīng)Sau 3AI不完全酶切后,與BamHI酶切并CIAP處理后的pUC19連接,然后轉(zhuǎn)化DH5a,但是我的轉(zhuǎn)化涂平板長得克隆很少。pUC19切之后跑膠回收條帶清晰,沒有彌散。感受態(tài)細胞驗證沒有問題,載體自連的話我用了56 ng pUC進行驗證,長了幾十個菌落。那么您認為是我的連接有問題還是轉(zhuǎn)化有問題呢? 會不會是連接的量太少?我10ul的連接體系里面有30 ng的載體,150 ng左右的插入片段(2-5kb),16度16 h左右,然后全部涂板,但是只長了幾十個克隆,太郁悶了。 我想問一下,你的連接體系里面,pUC19和插入片段分別加了多少ng?連接了多久呢? |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿085600中科院寧波所276分求調(diào)劑 +6 | 材料學(xué)257求調(diào)劑 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)279求調(diào)劑 +5 | 哈哈哈^_^ 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
[考研]
|
Gymno 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +11 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +17 | oatmealR 2026-03-29 | 18/900 |
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +8 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑,一志愿山東大學(xué) 342 分 +7 | Shern—- 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +7 | 1294608413 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +6 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | dfffsar 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +10 | 15188958825 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
[考研] 2026年華南師范大學(xué)歡迎化學(xué),化工,生物,生醫(yī)工等專業(yè)優(yōu)秀學(xué)子加入! +3 | llss0711 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +4 | 蝶舞輕繞 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
[考研] 336材料求調(diào)劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
[考研] 總分322求生物學(xué)/生化與分子/生物信息學(xué)相關(guān)調(diào)劑 +5 | 星沉uu 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料與化工303分求調(diào)劑 +4 | 為學(xué)666 2026-03-24 | 4/200 |
|