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碧海行帆金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
真菌轉(zhuǎn)化子PCR驗(yàn)證問(wèn)題
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| 跟大家探討一個(gè)問(wèn)題,我做真菌的基因敲除,目前得到了24個(gè)轉(zhuǎn)化子,進(jìn)行PCR驗(yàn)證的時(shí)候,抗性基因也就是陽(yáng)性對(duì)照成功擴(kuò)出,要敲除的目的基因都沒(méi)有擴(kuò)出,按理說(shuō)應(yīng)該是都敲除了,但轉(zhuǎn)化率達(dá)到了100%,大家說(shuō)有這種可能嗎??? |

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
| 如果有抗性基因而要敲除的基因還在的話才有問(wèn)題,那說(shuō)明不能用抗性基因來(lái)篩選目的基因了。此外,我覺(jué)得你最好不要用PCR負(fù)結(jié)果來(lái)證明敲除基因不在了,應(yīng)該用敲除基因序列兩端的DNA序列做PCR,確定突變株的帶(含抗性基因)位置和野生型不同,并且不含野生型的帶。 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
金蟲(chóng) (初入文壇)

金蟲(chóng) (初入文壇)

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