 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 酶切后的補平連接
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2333 | 回復: 9 | |||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
酶切后的補平連接 已有4人參與
|
|||
|
我正在構(gòu)一個長片段的載體，3500的基因往6100的載體上連。 但載體上對應基因的酶切位點很少，用MBI的快速酶切載體和基因，基因的上游只能用平末端酶，構(gòu)載體時上游沒有合適的酶切位點，只能用一個普通的酶切割后，再用補平酶將其末端補平，然后再進行第二次酶切，下游的酶切位點是粘性末端，雙酶切產(chǎn)物純化后連接。 我現(xiàn)在遇到的問題是載體經(jīng)過第一次單切，末端補平，第二次單切純化后與基因相連（基因是這兩個酶同時切，上游平下游粘），但就是連不上。MBI的說明書上說快速酶，補平酶的buffer可以通用，效率都可達到100%，因此在第一次單切后補平時就沒有純化，直接在里面加上補平酶，反應結(jié)束后，再加一些第二次單切的酶，最后再純化。 我想問一下，在這個一次單切，補平，二次單切的過程中是不是有什么需要注意的事項，我現(xiàn)在懷疑我的載體要么有一個酶沒有切開，要么就是補平不完全，導致與基因的雙酶切產(chǎn)物連不上。 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有156人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關于平末端連接
已經(jīng)有14人回復
- 關于酶切后的連接問題，共同探討共同進步
已經(jīng)有18人回復
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復
- pAN7-1質(zhì)粒分析
已經(jīng)有18人回復
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復
- 單酶切連接的問題
已經(jīng)有4人回復
- 連接酶切問題
已經(jīng)有10人回復
- DNA的連接反應
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端補平
已經(jīng)有4人回復
- 已知全長基因怎樣克隆并構(gòu)建表達載體
已經(jīng)有8人回復
- 【求助/交流】T-DNA全長約10000bp能否轉(zhuǎn)入植物基因組。
已經(jīng)有22人回復
- 【求助/交流】關于酶切產(chǎn)物連接的一點問題
已經(jīng)有13人回復
- 【求助/交流】酶切位點重合了的兩個酶的酶切問題
已經(jīng)有13人回復
- 請教：Xho1的酶切連接
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】單酶切連接的克隆急……
已經(jīng)有10人回復
- 【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問題
已經(jīng)有5人回復
liyu0355
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 33 (小學生)
- 金幣: 3566.3
- 紅花: 5
- 帖子: 402
- 在線: 336.2小時
- 蟲號: 13467
- 注冊: 2003-05-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達調(diào)控與表觀遺傳學
4樓2013-03-13 08:32:04
2樓2013-03-13 01:42:20
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學
3樓2013-03-13 04:06:32
5樓2013-03-13 10:20:20
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 081200-11408-276學碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 083000學碩274求調(diào)劑 +8 | Li李魚 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機化學 +3 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +4 | wulanna 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300求調(diào)劑306分 +4 | 26要上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +4 | 來財aa 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086502化學工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +7 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 331環(huán)境科學與工程求調(diào)劑 +3 | 熠然好運氣 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 柚柚yoyo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 281求調(diào)劑 +3 | 亞克西good 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研一志愿蘇州大學初始315（英一）求調(diào)劑 +3 | sbdksD 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +3 | desto 2026-03-24 | 3/150 |
|