 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2332 | 回復(fù): 9 | |||
[交流]
酶切后的補(bǔ)平連接 已有4人參與
|
|
我正在構(gòu)一個長片段的載體，3500的基因往6100的載體上連。 但載體上對應(yīng)基因的酶切位點(diǎn)很少，用MBI的快速酶切載體和基因，基因的上游只能用平末端酶，構(gòu)載體時上游沒有合適的酶切位點(diǎn)，只能用一個普通的酶切割后，再用補(bǔ)平酶將其末端補(bǔ)平，然后再進(jìn)行第二次酶切，下游的酶切位點(diǎn)是粘性末端，雙酶切產(chǎn)物純化后連接。 我現(xiàn)在遇到的問題是載體經(jīng)過第一次單切，末端補(bǔ)平，第二次單切純化后與基因相連（基因是這兩個酶同時切，上游平下游粘），但就是連不上。MBI的說明書上說快速酶，補(bǔ)平酶的buffer可以通用，效率都可達(dá)到100%，因此在第一次單切后補(bǔ)平時就沒有純化，直接在里面加上補(bǔ)平酶，反應(yīng)結(jié)束后，再加一些第二次單切的酶，最后再純化。 我想問一下，在這個一次單切，補(bǔ)平，二次單切的過程中是不是有什么需要注意的事項(xiàng)，我現(xiàn)在懷疑我的載體要么有一個酶沒有切開，要么就是補(bǔ)平不完全，導(dǎo)致與基因的雙酶切產(chǎn)物連不上。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有184人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于平末端連接
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于酶切后的連接問題，共同探討共同進(jìn)步
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- pAN7-1質(zhì)粒分析
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 單酶切連接的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 連接酶切問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- DNA的連接反應(yīng)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端補(bǔ)平
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 已知全長基因怎樣克隆并構(gòu)建表達(dá)載體
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】T-DNA全長約10000bp能否轉(zhuǎn)入植物基因組。
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切位點(diǎn)重合了的兩個酶的酶切問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 請教：Xho1的酶切連接
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】單酶切連接的克隆急……
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 57 (初中生)
- 金幣: 1896.7
- 紅花: 3
- 帖子: 262
- 在線: 306.9小時
- 蟲號: 2222431
- 注冊: 2013-01-05
2樓2013-03-13 01:42:20
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2013-03-13 04:06:32
liyu0355
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 3566.3
- 紅花: 5
- 帖子: 402
- 在線: 336.2小時
- 蟲號: 13467
- 注冊: 2003-05-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
4樓2013-03-13 08:32:04
5樓2013-03-13 10:20:20
6樓2013-03-13 10:21:15
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
7樓2013-03-13 10:27:18
8樓2013-03-13 10:59:31
Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 57 (初中生)
- 金幣: 1896.7
- 紅花: 3
- 帖子: 262
- 在線: 306.9小時
- 蟲號: 2222431
- 注冊: 2013-01-05
9樓2013-03-13 11:21:16
574759350
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 183
- 帖子: 100
- 在線: 22.4小時
- 蟲號: 646680
- 注冊: 2008-11-05
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
10樓2013-10-08 16:00:47
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小貓三兩只 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +9 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 各位老師好，我的一志愿為北京科技大學(xué)085601材料專碩 +7 | Koxui 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +10 | Mr. Z 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
[考研]
 一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
+7
|
nnnnnnn5 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +9 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 【求調(diào)劑】085601材料工程專碩 | 總分272 | +6 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，335分，0856，求調(diào)劑院校和導(dǎo)師 +4 | 傾____蕭 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +4 | lim0922 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 總分322求生物學(xué)/生化與分子/生物信息學(xué)相關(guān)調(diào)劑 +5 | 星沉uu 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調(diào)劑 +4 | 地球繞著太陽轉(zhuǎn) 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪�。�！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|