 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2336 | 回復(fù): 9 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
酶切后的補(bǔ)平連接 已有4人參與
|
|||
|
我正在構(gòu)一個(gè)長片段的載體，3500的基因往6100的載體上連。 但載體上對(duì)應(yīng)基因的酶切位點(diǎn)很少，用MBI的快速酶切載體和基因，基因的上游只能用平末端酶，構(gòu)載體時(shí)上游沒有合適的酶切位點(diǎn)，只能用一個(gè)普通的酶切割后，再用補(bǔ)平酶將其末端補(bǔ)平，然后再進(jìn)行第二次酶切，下游的酶切位點(diǎn)是粘性末端，雙酶切產(chǎn)物純化后連接。 我現(xiàn)在遇到的問題是載體經(jīng)過第一次單切，末端補(bǔ)平，第二次單切純化后與基因相連（基因是這兩個(gè)酶同時(shí)切，上游平下游粘），但就是連不上。MBI的說明書上說快速酶，補(bǔ)平酶的buffer可以通用，效率都可達(dá)到100%，因此在第一次單切后補(bǔ)平時(shí)就沒有純化，直接在里面加上補(bǔ)平酶，反應(yīng)結(jié)束后，再加一些第二次單切的酶，最后再純化。 我想問一下，在這個(gè)一次單切，補(bǔ)平，二次單切的過程中是不是有什么需要注意的事項(xiàng)，我現(xiàn)在懷疑我的載體要么有一個(gè)酶沒有切開，要么就是補(bǔ)平不完全，導(dǎo)致與基因的雙酶切產(chǎn)物連不上。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有130人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于平末端連接
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 關(guān)于酶切后的連接問題，共同探討共同進(jìn)步
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- pAN7-1質(zhì)粒分析
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 基因克隆中酶切連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 單酶切連接的問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 連接酶切問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- DNA的連接反應(yīng)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端補(bǔ)平
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 已知全長基因怎樣克隆并構(gòu)建表達(dá)載體
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】T-DNA全長約10000bp能否轉(zhuǎn)入植物基因組。
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點(diǎn)問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切位點(diǎn)重合了的兩個(gè)酶的酶切問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 請(qǐng)教：Xho1的酶切連接
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】單酶切連接的克隆急……
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】質(zhì)粒pPICZA酶切問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
7樓2013-03-13 10:27:18
Haibara_Ai
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 57 (初中生)
- 金幣: 1896.7
- 紅花: 3
- 帖子: 262
- 在線: 306.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 2222431
- 注冊(cè): 2013-01-05
2樓2013-03-13 01:42:20
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時(shí)
- 蟲號(hào): 1614001
- 注冊(cè): 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2013-03-13 04:06:32
liyu0355
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 33 (小學(xué)生)
- 金幣: 3566.3
- 紅花: 5
- 帖子: 402
- 在線: 336.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 13467
- 注冊(cè): 2003-05-31
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
4樓2013-03-13 08:32:04
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +7 | 蕉蕉123 2026-03-28 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)材料與化工（085600）296求調(diào)劑 +13 | 稻妻小編 2026-03-26 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | raojunqi0129 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學(xué)求調(diào)劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +5 | dongfang59 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +11 | 陽陽哇塞 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分求調(diào)劑 +8 | 你好明天你好 2026-03-23 | 9/450 |
|
|
|
[碩博家園] 北京林業(yè)大學(xué)碩導(dǎo)招生廣告 +6 | kongweilin 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 271求調(diào)劑 +6 | 生如夏花… 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 總分293求調(diào)劑 +6 | 加一一九 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)339材料與化工求調(diào)劑 +3 | 江往賣魚 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩找調(diào)劑 +5 | 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +4 | 王大坦1 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 280分求調(diào)劑 一志愿085802 +4 | PUMPT 2026-03-22 | 7/350 |
|