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leonvicki銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
若想獲得一個蛋白，如何從基因開始到純化到拿到蛋白
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小弟初入生物殿堂，勞煩各位大神寫個詳細的流程，感謝賜教 若想獲得一個蛋白，如何從基因開始到純化到拿到蛋白 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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小科研女dow
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
gyesang: 金幣+5, 總結的很詳細，一目了然，鼓勵應助，期待更多精彩的回答！ 2013-03-15 00:34:01
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 詳細，熱心，鼓勵給予EPI 2013-03-15 08:04:36
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簡單說幾句撒 1 首先知道了序列后設計引物 2 做引物PCR 3 電泳驗證序列大小 4 切膠回收 5 與T載體連接后轉換涂平板 6 依據平板菌落做菌落PCR 7 電泳驗證菌落PCR結果選擇正確的單菌落送去測序 8 測序結果在NCBI上BLAST證明為你所要的序列 9 挑測序正確的單菌落姐試管或者搖瓶后進行質粒中提 10 再做引物PCR 11回收PCR產物 12 將回收片段與所要載體進行雙酶切 12 連接轉化進入感受態(tài)后涂平板 13 質粒中提 轉化進入表達感受態(tài)中 14 誘導表達 15 細胞破碎（胞內產物的話）得到粗蛋白 16 蛋白純化（若有HIS過鎳柱純化，若無，硫酸銨梯度純化） 17 得到純化后的蛋白為你所用 PS：與T載體連接的一步可有可無。若急于知道是否序列正確，可先這樣做。 |
3樓2013-03-14 22:00:19
云琪
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- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
2樓2013-03-14 20:06:29
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4樓2013-03-15 01:47:49
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