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leonvicki銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
若想獲得一個蛋白，如何從基因開始到純化到拿到蛋白
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小弟初入生物殿堂，勞煩各位大神寫個詳細(xì)的流程，感謝賜教 若想獲得一個蛋白，如何從基因開始到純化到拿到蛋白 |
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云琪
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2樓2013-03-14 20:06:29
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 總結(jié)的很詳細(xì)，一目了然，鼓勵應(yīng)助，期待更多精彩的回答！ 2013-03-15 00:34:01
小丹木木: 金幣+2, MolEPI+1, 詳細(xì)，熱心，鼓勵給予EPI 2013-03-15 08:04:36
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簡單說幾句撒 1 首先知道了序列后設(shè)計引物 2 做引物PCR 3 電泳驗證序列大小 4 切膠回收 5 與T載體連接后轉(zhuǎn)換涂平板 6 依據(jù)平板菌落做菌落PCR 7 電泳驗證菌落PCR結(jié)果選擇正確的單菌落送去測序 8 測序結(jié)果在NCBI上BLAST證明為你所要的序列 9 挑測序正確的單菌落姐試管或者搖瓶后進(jìn)行質(zhì)粒中提 10 再做引物PCR 11回收PCR產(chǎn)物 12 將回收片段與所要載體進(jìn)行雙酶切 12 連接轉(zhuǎn)化進(jìn)入感受態(tài)后涂平板 13 質(zhì)粒中提 轉(zhuǎn)化進(jìn)入表達(dá)感受態(tài)中 14 誘導(dǎo)表達(dá) 15 細(xì)胞破碎（胞內(nèi)產(chǎn)物的話）得到粗蛋白 16 蛋白純化（若有HIS過鎳柱純化，若無，硫酸銨梯度純化） 17 得到純化后的蛋白為你所用 PS：與T載體連接的一步可有可無。若急于知道是否序列正確，可先這樣做。 |
3樓2013-03-14 22:00:19
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4樓2013-03-15 01:47:49
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