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stickforver銀蟲(chóng) (小有名氣)
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如何將保存在克隆載體上的目的基因連接到表達(dá)載體上
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| 本人要用到的目的基因被保存在PMD19-T質(zhì)�！，F(xiàn)今要將該目的基因連接到表達(dá)載體上，要怎么操作呢？是直接提質(zhì)粒酶切獲得目的基因呢？還是提質(zhì)粒后PCR來(lái)得到目的基因？如果是提質(zhì)粒后直接酶切要用什么酶呢？當(dāng)時(shí)目的基因片段與T載體通過(guò)的時(shí)T-A配對(duì)連接上去的，如今要怎么將目的基因切回下來(lái) |
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王文釗-
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)積極發(fā)貼應(yīng)助！ 2013-03-17 19:00:25
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直接提質(zhì)粒酶切就好。 但是，要現(xiàn)在你的表達(dá)載體上找兩個(gè)酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)引物，做PCR，把酶切位點(diǎn)加到你的目的片段兩端，再連到克隆載體上，然后提質(zhì)粒，做雙酶切，得到兩端加上酶切位點(diǎn)的目的片段。表達(dá)載體同樣用這兩個(gè)酶切，得到載體片段，把你的目的片段和表達(dá)載體片段做酶連，就可以連上了。 |
2樓2013-03-17 14:24:28
yb19841014
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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3樓2013-03-17 14:56:09
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