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hylee103

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[求助] 酶切產(chǎn)物能直接做連接反應(yīng)嗎

酶切產(chǎn)物，不做膠回收，直接做連接反應(yīng)，是否可行？

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1樓 2013-03-21 08:25:40

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cucu奶茶

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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同意二樓的。你得到的轉(zhuǎn)化子不好鑒定是目的片段還是非目的片段。還是得用回收產(chǎn)物做鑒定。

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3樓2013-03-21 09:12:47

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xy656691

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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不可行，假陽(yáng)性太高了。你切開(kāi)的質(zhì)粒會(huì)重新連在一起的

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2樓2013-03-21 08:43:22

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Haibara_Ai

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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看你怎么切的，柱子可以洗掉和primer大小相仿的DNA（大概60-70bp），來(lái)源于pcr得話(huà)模板少加點(diǎn)，或者加DpnI一起切都行。
如果一部分來(lái)自pcr一部分來(lái)自質(zhì)粒得話(huà)可以做去磷酸化，搞清楚原理自己決定好了

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4樓2013-03-21 12:10:16

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cicelyzh

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如果是從質(zhì)粒上切下來(lái)的不行，片段會(huì)連回到原來(lái)的載體里。如果是PCR產(chǎn)物是可以的。連接前要把限制性?xún)?nèi)切酶失活。對(duì)于不能加熱失活的酶，不要用直接連。

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5樓2013-03-22 02:51:23

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