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real-time引物設(shè)計問題，關(guān)于保守取，內(nèi)含子
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real-time引物設(shè)計問題，怎么弄么？說的是要在保守區(qū)設(shè)計，但是保守取是那部分呢？怎么找？還有就是要跨內(nèi)含子……怎么知道哪兒有內(nèi)含子啊 |
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3樓2013-03-30 21:55:44
chnfhjxl
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gyesang: 回帖置頂 2013-04-26 21:25:29
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gyesang: 回帖置頂 2013-04-26 21:25:29
| NCBI上每個核酸序列信息的旁邊有個Pick Primer 點(diǎn)進(jìn)去，把你自己設(shè)計好的引物輸進(jìn)去，然后看看結(jié)果是不是跨內(nèi)含子的。不過要求的跨內(nèi)含子是針對RNA表達(dá)量檢測的。如果是檢測菌的數(shù)量等DNA水平的話，就不需要了。至于所謂的保守，我就不清楚了，你的試驗(yàn)?zāi)康牟煌�，real time 的引物要求也不同的。不要死扣那些引物設(shè)計規(guī)則。祝你好運(yùn)吧 |
2樓2013-03-30 12:05:01
stt19890101
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4樓2013-03-31 09:54:37
chnfhjxl
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序列下面有紅色的區(qū)域，紅色的是蛋白質(zhì)編碼區(qū)，也就是外顯子區(qū)域，然后去查查這個基因DNA的信息，就知道是不是跨內(nèi)含子了。一般在外顯子區(qū)域內(nèi)的大多都可以跨內(nèi)含子了。 其實(shí)所謂跨內(nèi)含子只不過是為了防止你RNA 中含有DNA。其實(shí)最簡單的辦法是在RNA提取后加DNA酶消化過程，或者做一個不反轉(zhuǎn)錄直接PCR的對照，如果也P的出來就說明你的熒光定量要用跨內(nèi)含子的引物了。 |
5樓2013-03-31 12:17:22
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