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連接轉(zhuǎn)化不長菌是怎么回事？？？
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| 連接1.5KB的片段 轉(zhuǎn)化后涂平板不長菌 是怎么回事？？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-04-11 17:18:55
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可能原因有: 酶切問題，由于未長菌落，載體未切開的可能性較小，但片段可能沒切開，或其中一個(gè)切開了，另一個(gè)未切開，建議pcr產(chǎn)物直接聯(lián)PMD18T載體測序，再從T載體上酶切回收目的片段，另通過T載體測序分析，還可以看一下引物是否正常，我們就遇到過引物出問題的情況。 連接問題，鑒于片段較大，調(diào)整載體與片段比例，重新連接，當(dāng)然必須保證連接酶首先沒問題。 轉(zhuǎn)化問題：感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率如何，建議驗(yàn)證一下，建議作空載體轉(zhuǎn)化對照。 |
7樓2013-04-11 14:23:21
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是不是鏈接時(shí)間太短了啊 8樓2013-04-11 15:43:26
zhenwuhuang
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10樓2013-04-11 16:18:17
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