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TA克隆的問題
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| 我的目的條帶是785bp，拿目的條帶與pTG19-T連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行菌液PCR時(shí)，條帶都500bp以下，用M13通用引物做PCR發(fā)現(xiàn)不是沒有連接上，只是連接的片段很短，不知道是哪里出了問題？ |
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xiemin217
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3樓2013-05-10 15:09:06
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2樓2013-05-10 14:18:29
lihaiyan0208
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【答案】應(yīng)助回帖
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liuxiuaza(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-13 12:50:25
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| 你可能是膠回收的時(shí)候，可能紫外照射時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致片段斷裂，你試下看膠回收時(shí)注意下紫外照射時(shí)間盡量短些。還有你用M13檢測(cè)的話應(yīng)該是只能檢測(cè)是否連接上片段吧，你能確定連接上的就是你的目的片段，而不是雜帶。你挑了多少也菌斑檢測(cè)啊，你可以試著多挑一些試試，我當(dāng)時(shí)也有這種情況，后來多挑幾個(gè)就發(fā)現(xiàn)正確的目的條帶了。 |
4樓2013-05-10 23:08:13
cicelyzh
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5樓2013-05-11 07:04:21
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