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[求助]
TA克隆的問題
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| 我的目的條帶是785bp,拿目的條帶與pTG19-T連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,進(jìn)行菌液PCR時(shí),條帶都500bp以下,用M13通用引物做PCR發(fā)現(xiàn)不是沒有連接上,只是連接的片段很短,不知道是哪里出了問題? |
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
木蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
鐵蟲 (初入文壇)
| 你可能是膠回收的時(shí)候,可能紫外照射時(shí)間過長(zhǎng),導(dǎo)致片段斷裂,你試下看膠回收時(shí)注意下紫外照射時(shí)間盡量短些。還有你用M13檢測(cè)的話應(yīng)該是只能檢測(cè)是否連接上片段吧,你能確定連接上的就是你的目的片段,而不是雜帶。你挑了多少也菌斑檢測(cè)啊,你可以試著多挑一些試試,我當(dāng)時(shí)也有這種情況,后來多挑幾個(gè)就發(fā)現(xiàn)正確的目的條帶了。 |
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