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[求助]
關(guān)于DNase1 去除提取的RNA中基因組DNA的問題 已有2人參與
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從細(xì)胞中提取的RNA,逆轉(zhuǎn)錄后PCR,沒有轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細(xì)胞也總是可以擴增出我的目的條帶,這是什么原因? 還有就是通過DNase1 可以去除基因組DNA嗎?去除后可以直接逆轉(zhuǎn)錄嗎,還是得純化后逆轉(zhuǎn)錄,那TAKARA的說明書實在是太復(fù)雜了。貌似第三步去除了基因組DNA后,第四步又開始了純化,實在是沒明白,求助大俠幫忙啊。! |
分子生化實驗經(jīng)驗積累 |

木蟲 (正式寫手)
| 不知道你的RNA是不是做realtime PCR,一般情況是,為了防止基因組被擴增,第一要去除RNA中的DNA,就是你正常抽出RNA,加入DNaseI和RNA抑制劑,同時處理后,就再重新加入RNAiso再抽提一輪就可以;第二在設(shè)計引物的時候要跨內(nèi)含子設(shè)計,該內(nèi)含子長度一般要超過1Kb,不然也會有非特異性擴增。不知道你是不是這樣的 |
銀蟲 (小有名氣)

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