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crazymouse66金蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒的連接與轉(zhuǎn)化
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| 大家好，我用一株細菌做完菌液PCR后跑瓊脂糖電泳，跑完后做切膠回收，用的是試劑盒（試劑盒稍微有點過期了，但是回收完后我測了下DNA濃度和純度，還是挺好的），然后再和PMD18T質(zhì)粒進行質(zhì)粒連接，連接用了一個晚上，是16度和4度交替連接，然后導入大腸桿菌感受態(tài)細胞中，最后涂板，用的是AMP氨芐平板，37度培養(yǎng)。但是現(xiàn)在的情況是：我連著做了兩次，到最后平板上都沒有菌落長出來，請問這大概是什么情況呢？是不是直接做的菌液PCR不能這樣做啊？是否哪一步出現(xiàn)了問題，請大家指點一下。謝謝。 |
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yangtianyuan
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| T載體是TA克隆專用載體，你PCR用的酶要是不能在PCR產(chǎn)物的3‘端添加一個A的話是無法和T載體連接上的，而且你的感受態(tài)的效率要驗證一下，看看轉(zhuǎn)化實驗室的已知質(zhì)粒是否能轉(zhuǎn)進去。 |
8樓2013-05-29 22:40:32
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