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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 質粒的連接與轉化
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crazymouse66金蟲 (正式寫手)
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[求助]
質粒的連接與轉化
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| 大家好，我用一株細菌做完菌液PCR后跑瓊脂糖電泳，跑完后做切膠回收，用的是試劑盒（試劑盒稍微有點過期了，但是回收完后我測了下DNA濃度和純度，還是挺好的），然后再和PMD18T質粒進行質粒連接，連接用了一個晚上，是16度和4度交替連接，然后導入大腸桿菌感受態(tài)細胞中，最后涂板，用的是AMP氨芐平板，37度培養(yǎng)。但是現(xiàn)在的情況是：我連著做了兩次，到最后平板上都沒有菌落長出來，請問這大概是什么情況呢？是不是直接做的菌液PCR不能這樣做��？是否哪一步出現(xiàn)了問題，請大家指點一下。謝謝。 |
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4樓2013-05-28 19:51:20
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