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袁1231金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助western blot問(wèn)題
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大家能幫我看下，這個(gè)是什么問(wèn)題嗎？western 新手。 前兩張圖，一張是SDS-PAGE 膠染色后，一張是轉(zhuǎn)膜后western. 什么都看不出來(lái)。后兩個(gè)都是western，背景很強(qiáng)，大家覺(jué)得我改怎么做？ 已經(jīng)是用10%的牛奶block了，難道我要換BSA試試？還是我一抗二抗的濃度加高了？謝謝大家。 2013-06-01_10-54-56_8bit.png 2013-06-01_13-08-28_8bit.png 2013-06-01_13-24-46_8bit.png 2013-06-01_13-51-50_8bit.png |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
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袁1231: 金幣+2 2013-06-05 10:59:19
袁1231: 金幣+2 2013-06-05 10:59:19
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轉(zhuǎn)膜和電泳的原理差不多，大蛋白跑得慢，小蛋白跑得快，所以轉(zhuǎn)小蛋白所用的時(shí)間少一些，也可以適當(dāng)降低電流。轉(zhuǎn)膜的情況可以把膠染一下看看有沒(méi)有殘留。染膜當(dāng)然也可以的，但染膜的反差比膠要差。如果用麗春紅這樣的染料，靈敏度不高，所以有時(shí)候看不到。我轉(zhuǎn)NC膜用的條件與PVDF的一樣，只是膜的性質(zhì)不同，NC膜是親水的，而且比較脆，操作的時(shí)候要小心一點(diǎn)。 |
9樓2013-06-04 11:00:48
cicelyzh
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