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[求助] western目的蛋白發(fā)生漂移

麻煩各位western界的朋友們幫個忙：小弟跑目的蛋白時發(fā)生漂移，表現(xiàn)為目的蛋白本來是36KD，而通過標(biāo)準(zhǔn)蛋白分析，該蛋白大概為28KD（然而，我同一批跑的其它蛋白包括Actin卻沒有這種問題），但我將自己可能出錯的地方都糾正了，跑了4次還是一樣，崩潰，請大家支支招啦，謝謝！（一抗是SANTA CRUZ的剛剛買來不久，應(yīng)該沒什么問題）

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1樓 2013-06-06 22:50:45

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cicelyzh

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SDS-PAGE上蛋白的表觀分子量與理論值有差別是正常現(xiàn)象，和蛋白本身的性質(zhì)有關(guān)，不用太在意的。

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2樓2013-06-07 00:33:45

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songzuowei

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你這個36KD跑成28KD很正常啊有時還會變大那是蛋白糖基化等造成的

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3樓2013-06-07 11:00:56

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3樓: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 11:00:56
你這個36KD跑成28KD很正常啊有時還會變大那是蛋白糖基化等造成的

你好，我的是蛋白分子量變小了，本來是36KD的，現(xiàn)在是約28KD，我有個博士師兄建議我實在不行將現(xiàn)在的SANTA CRUZ抗體換下，不知SANTA CRUZ抗體是否有時會出現(xiàn)這樣不好的現(xiàn)象？

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4樓2013-06-07 16:56:53

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songzuowei

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kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-06-12 22:04:12

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4樓: Originally posted by l19z88y22 at 2013-06-07 16:56:53
你好，我的是蛋白分子量變小了，本來是36KD的，現(xiàn)在是約28KD，我有個博士師兄建議我實在不行將現(xiàn)在的SANTA CRUZ抗體換下，不知SANTA CRUZ抗體是否有時會出現(xiàn)這樣不好的現(xiàn)象？...

這個抗體只是與目的蛋白的抗原結(jié)合，信號放大指示有沒有目的蛋白和目的蛋白的大小，只是個指示作用，蛋白條帶大小是跟你的目的蛋白有關(guān)，有時候目的蛋白空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化或者是糖基化等因素使其在聚丙烯酰胺凝膠里跑快一點或者跑慢一點很正常，我覺得你這個變小了也正常嘛，沒事的

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5樓2013-06-07 17:19:03

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5樓: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 17:19:03
這個抗體只是與目的蛋白的抗原結(jié)合，信號放大指示有沒有目的蛋白和目的蛋白的大小，只是個指示作用，蛋白條帶大小是跟你的目的蛋白有關(guān)，有時候目的蛋白空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化或者是糖基化等因素使其在聚丙烯酰胺凝膠里 ...

謝謝，不過我不是完全同意您的看法，抗體也有可能與其它具有類似抗原的蛋白接合，這也是為什么雜帶產(chǎn)生的原因。

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6樓2013-06-08 09:58:25

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6樓: Originally posted by l19z88y22 at 2013-06-08 09:58:25
謝謝，不過我不是完全同意您的看法，抗體也有可能與其它具有類似抗原的蛋白接合，這也是為什么雜帶產(chǎn)生的原因。...

雜帶的產(chǎn)生是由于你的抗體質(zhì)量本身不好特異性不強或者封閉沒有封閉好雜帶是經(jīng)常出現(xiàn)，但理論上是不應(yīng)該出現(xiàn)的

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7樓2013-06-08 13:19:55

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木笑子

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會不會蛋白降解了呢。

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8樓2013-06-09 09:49:45

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