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小沐蟲金蟲 (初入文壇)
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[求助]
急求 植物CAT酶活的測(cè)定方法 �。�！
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| 最近，在做水稻葉片CAT酶活的測(cè)定，怎么都測(cè)不出來。我是用緩沖液PBS7.0做空白調(diào)零，反應(yīng)液是用0.1M的30%的過氧化氫和0.1M的PBS7.0按1:4混勻，用2.5ml的反應(yīng)液加酶液50ul到于比色皿中，在240nm下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果竟為0.000 ~~不知道為什么？急求大家指點(diǎn)下~~非常感謝~~· |
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小沐蟲
金蟲 (初入文壇)
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7樓2013-06-22 14:52:31
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小沐蟲: 金幣+6 2013-06-22 14:28:49
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小沐蟲: 金幣+6 2013-06-22 14:28:49
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CAT測(cè)定是比較簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，你的方法基本上沒什么問題，可以從這幾個(gè)方面檢查： 1 分光光度計(jì)是否工作正常？樓主的檢測(cè)試劑有沒有問題？H2O2常溫長(zhǎng)時(shí)間放置很容易失效，0.1M H2O2最好用新鮮試劑臨用前配置。 2 你添加的樣品量是否足夠？在酶提取時(shí)，一般可以用0.5 g植物材料在5 ml緩沖液中研磨提取。不知樓主用的是多少？為了驗(yàn)證提取和樣品量，檢測(cè)體系都正常，樓主可以試試做預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如加2 ml H2O2，2 ml提取緩沖液，2 ml提取樣品混合，看看240 nm下是否存在吸光度變化。 |
2樓2013-06-20 21:46:53
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
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看到樓主在其他帖子里求助CAT檢測(cè)方法，可以參考這個(gè) Misako Kato, Seki Shimizu. Chlorophyll metabolism in higher plants. VII. Chlorophyll degradation in senescing tobacco leaves; phenolic-dependent peroxidative degradation. Canadian Journal of Botany, 1987, 65(4): 729-735, 10.1139/b87-097 Catalase activity was assayed by measuring the initial rate of disappearance of H202. Three millilitres of reaction mixture contained 0.1 M sodium phosphate buffer, pH 7.0, 2 mM H20,, and 0.1 mL enzyme extract. The decrease in H,O, was followed as a decline in optical density at 240 nm and activity was calculated using the extinction coefficient (40.0 mM" cm-' at 240 nm) for H,O, |
3樓2013-06-20 21:50:00
匿名
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千年老妖
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4樓2013-06-21 12:57:39
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