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很奇怪的酶切連接問題
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| 我分別雙酶切表達(dá)載體和T-載體,再分別回收目的片段(16000bp和1100bp),在連接熱擊轉(zhuǎn)化,挑取單克隆,pcr驗(yàn)證,挑陽(yáng)性測(cè)序,測(cè)序結(jié)果正確(因?yàn)楸磉_(dá)載體沒有通用引物,所以就用的自己的目的片段的引物測(cè)序,據(jù)師兄說這樣測(cè)序開頭和結(jié)尾是不準(zhǔn)確的,中間的序列才有說服力,測(cè)序的結(jié)果表明中間的序列確實(shí)是我目的片段上的序列,因此我覺得我連接成功了,這樣理解不知對(duì)不對(duì)?),可奇怪的是:我再雙酶切重組質(zhì)粒時(shí)卻切不下來(lái)了,試了好幾次,也試著改變酶切體系,可還是不行,沒有目的條帶,只有質(zhì)粒一條帶,求解。。。。。。。。 |
核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
新蟲 (小有名氣)


銅蟲 (小有名氣)
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