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ginnyzhuzhu新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助western-blot實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作？一抗二抗怎么確定？
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| 我在做真核原核表達(dá)，蛋白檢測(cè)想用western-blot,但是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有師兄師姐會(huì)，想請(qǐng)教一下實(shí)驗(yàn)之前需要準(zhǔn)備什么，一抗二抗怎么確定？是設(shè)計(jì)好讓生物公司合成嗎？要怎么設(shè)計(jì)呢？ |
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cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-07-12 13:27:11
ginnyzhuzhu: 金幣+3, ★★★很有幫助, 謝謝吶~ 2013-07-14 10:47:38
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| 你需要制備蛋白樣品，跑SDS-PAGE，轉(zhuǎn)膜，封閉，然后用抗體孵育，最后顯影。如果你做的表達(dá)帶標(biāo)簽，一般公司有賣(mài)抗標(biāo)簽的一抗，直接買(mǎi)就行了。二抗是根據(jù)一抗的來(lái)源，常見(jiàn)的是鼠或者兔的，選擇抗一抗IgG的抗體，來(lái)源無(wú)所謂。二抗是偶聯(lián)酶的，常用的有過(guò)氧化物酶或者堿性磷酸酶。 |
2樓2013-07-12 11:55:13
xiaopingzi22
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2013-12-07 23:06:03
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