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piaoyunokok

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一般質(zhì)粒轉(zhuǎn)入酵母后，要怎樣驗(yàn)證是否成功轉(zhuǎn)入呢？質(zhì)粒上插入的片段在基因組上也有，而且轉(zhuǎn)入后也以質(zhì)粒形式存在的。
都要提取質(zhì)粒的話(huà)，工作量確實(shí)挺大的。而且我提取質(zhì)粒后做PCR，雖然有條帶，但是條帶大小不對(duì)啊。。。，有的去測(cè)序，結(jié)果和基因組上的某個(gè)基因是一樣的（質(zhì)粒上的啟動(dòng)子是該基因的），郁悶啊。。。不知道是什么原因

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1樓 2013-07-16 21:12:37

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piaoyunokok

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6樓: Originally posted by 20083630zhan at 2013-07-17 09:32:46
你的目的基因在質(zhì)粒和基因組上都有，有可能在你轉(zhuǎn)化的時(shí)候，質(zhì)粒上的基因與基因組上的基因重組了

理論上講，是有這個(gè)可能。但是PCR的條帶大小及測(cè)序結(jié)果都說(shuō)明不是啊，就是基因組上的另一個(gè)基因。。。

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7樓2013-07-17 10:04:03

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可以選擇培養(yǎng)基里面進(jìn)行培養(yǎng)，你提取PCR條帶怎么能不對(duì)呢。。估計(jì)是產(chǎn)物的濃度小了所以提取看不到吧。。

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2樓2013-07-16 21:52:57

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最靠譜的方法就是把質(zhì)粒提取出來(lái)測(cè)序。

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3樓2013-07-16 23:19:00

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2樓: Originally posted by 肅清華書(shū) at 2013-07-16 21:52:57
可以選擇培養(yǎng)基里面進(jìn)行培養(yǎng)，你提取PCR條帶怎么能不對(duì)呢。。估計(jì)是產(chǎn)物的濃度小了所以提取看不到吧。。

是在選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)的。條帶位置確實(shí)不對(duì)，而且還挺亮的呢。。。

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4樓2013-07-17 00:13:11

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