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原核表達蛋白時標簽無論在N端還是C端蛋白折疊時都被折進去了，怎么辦
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各位蟲蟲好，我最近在做原核表達蛋白，用的標簽是HIS-tag，發(fā)現(xiàn)標簽無論是在N端還是在C端，蛋白折疊時都把它折進去了，純化不了。我現(xiàn)在想的是是不是可以讓蛋白什么標簽都不帶，按分子量去分。我的方向本來是電化學的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道腫么辦，求蟲蟲指點。 |
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bullfrog325
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
amisking: 回帖置頂 2013-07-31 18:50:52
amisking: 金幣+3, 感謝發(fā)帖應助，幫助蟲子 2013-07-31 18:51:10
蛋炒飯1989: 金幣+5 2013-08-01 20:24:54
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蛋炒飯1989: 金幣+4 2013-08-01 20:28:06
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我想到4個辦法: 辦法1: 把發(fā)HIS換成GST, 因為GST自己有結構, 缺點是對目標蛋白的功能結構可能有破壞性的影響. 辦法2: 在HIS和目標蛋白之間加linker, 比方說GGSGGSGGS, 使得HIS和目標蛋白的距離疏遠些從而有機會不被折疊到內部, 缺點同上, 但是可能性小. 辦法3: 研究蛋白的3級結構(有類似的蛋白晶體發(fā)表再好不過了), 把HIS放在目標蛋白中間某個位置, 而這個位置是暴露在外的. 辦法4: 先用尿素對蛋白變性, 純化后再復性. 辦法2和3需要用mutagenesis辦法實現(xiàn), 樓主可以很容易在網(wǎng)上查到相關內容. 祝樓主成功  |
9樓2013-07-31 17:48:00
bleach060452
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2樓2013-07-31 11:43:14
3樓2013-07-31 12:10:54
4樓2013-07-31 12:26:37
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