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[求助]
原核表達(dá)蛋白時(shí)標(biāo)簽無(wú)論在N端還是C端蛋白折疊時(shí)都被折進(jìn)去了，怎么辦
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各位蟲(chóng)蟲(chóng)好，我最近在做原核表達(dá)蛋白，用的標(biāo)簽是HIS-tag，發(fā)現(xiàn)標(biāo)簽無(wú)論是在N端還是在C端，蛋白折疊時(shí)都把它折進(jìn)去了，純化不了。我現(xiàn)在想的是是不是可以讓蛋白什么標(biāo)簽都不帶，按分子量去分。我的方向本來(lái)是電化學(xué)的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道腫么辦，求蟲(chóng)蟲(chóng)指點(diǎn)。 |
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bullfrog325
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 回帖置頂 2013-07-31 18:50:52
amisking: 金幣+3, 感謝發(fā)帖應(yīng)助，幫助蟲(chóng)子 2013-07-31 18:51:10
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蛋炒飯1989: 金幣+4 2013-08-01 20:28:06
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我想到4個(gè)辦法: 辦法1: 把發(fā)HIS換成GST, 因?yàn)镚ST自己有結(jié)構(gòu), 缺點(diǎn)是對(duì)目標(biāo)蛋白的功能結(jié)構(gòu)可能有破壞性的影響. 辦法2: 在HIS和目標(biāo)蛋白之間加linker, 比方說(shuō)GGSGGSGGS, 使得HIS和目標(biāo)蛋白的距離疏遠(yuǎn)些從而有機(jī)會(huì)不被折疊到內(nèi)部, 缺點(diǎn)同上, 但是可能性小. 辦法3: 研究蛋白的3級(jí)結(jié)構(gòu)(有類(lèi)似的蛋白晶體發(fā)表再好不過(guò)了), 把HIS放在目標(biāo)蛋白中間某個(gè)位置, 而這個(gè)位置是暴露在外的. 辦法4: 先用尿素對(duì)蛋白變性, 純化后再?gòu)?fù)性. 辦法2和3需要用mutagenesis辦法實(shí)現(xiàn), 樓主可以很容易在網(wǎng)上查到相關(guān)內(nèi)容. 祝樓主成功  |
9樓2013-07-31 17:48:00
bleach060452
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2樓2013-07-31 11:43:14
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roomofxw
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6樓2013-07-31 14:34:03
7樓2013-07-31 16:12:04
8樓2013-07-31 17:30:12
匿名
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10樓2013-07-31 19:05:23
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