jue9958

5樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-05 00:42:28
看你要做什么實(shí)驗(yàn)了。如果只是需要同時(shí)P出兩個(gè)片段，直接用退火溫度低的那個(gè)溫度。如果是要做定量，需要優(yōu)化到兩個(gè)反應(yīng)的擴(kuò)增效率和特異性最好的溫度。

需要做定量的，求詳細(xì)指教。

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6樓2013-08-05 08:03:04

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jue9958

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2樓: Originally posted by duoyidian at 2013-08-04 10:54:59
看哪個(gè)引物做pcr反應(yīng)的速度慢，這個(gè)很多書(shū)上都有啊

呃。求相關(guān)書(shū)籍。

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7樓2013-08-05 08:04:05

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cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-08-06 09:43:31

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6樓: Originally posted by jue9958 at 2013-08-05 08:03:04
需要做定量的，求詳細(xì)指教。...

如果是定量，最好做溫度梯度檢查引物的特異性和大致的擴(kuò)增效率。當(dāng)然，退火溫度在設(shè)計(jì)引物時(shí)就要考慮。在選定優(yōu)化的退火溫度下做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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8樓2013-08-05 23:56:37

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yqx2966895

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gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-08-06 09:43:39

理論上引物的退火溫度即最適溫度為引物配方上的推薦溫度減去5/6度，具體一點(diǎn)的要自己按照梯度設(shè)計(jì)，或者樣品選擇設(shè)計(jì)。。。我懂的就這樣，希望對(duì)你有幫助

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9樓2013-08-06 00:10:09

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jue9958

新蟲(chóng) (小有名氣)

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引用回帖:

9樓: Originally posted by yqx2966895 at 2013-08-06 00:10:09
理論上引物的退火溫度即最適溫度為引物配方上的推薦溫度減去5/6度，具體一點(diǎn)的要自己按照梯度設(shè)計(jì)，或者樣品選擇設(shè)計(jì)。。。我懂的就這樣，希望對(duì)你有幫助

謝謝你。

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10樓2013-08-06 11:00:54

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