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[交流]
這兩個(gè)酶切位點(diǎn)有問題嗎？ 已有4人參與
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| 最近本人在做Spe1和Sac1這兩個(gè)酶的雙酶切連接實(shí)驗(yàn)，可是連接后做熱擊轉(zhuǎn)化就是不長單菌落，回收分別測了濃度，摩爾比是1：3-1：10，連接時(shí)16℃過夜，涂皿再過夜，就是不長單菌落，是什么原因？？急得很吶 郁悶！！��！ |
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2樓2013-08-12 13:37:12
mamadexiao
木蟲 (正式寫手)
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3樓2013-08-12 21:39:52
4樓2013-08-13 07:15:43
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5樓2013-08-13 09:05:36
卷舒_ray
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-08-13 16:30:14
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建議： 1.雖然雙酶切可以同時(shí)加兩個(gè)酶一起進(jìn)行，但如果逐個(gè)來更能確保酶切效果，尤其是如果有比較難切的酶，先確保單酶切成功，回收后再用另一個(gè)比較好切的酶 2.連接體系小些，全部轉(zhuǎn)化，最后菌液離心重懸后全部涂一塊抗性板，當(dāng)然，上面提到的連接反應(yīng)設(shè)立的陰性對照也如是操作，只有陰性對照幾乎沒有或至少比實(shí)驗(yàn)組明顯少菌落的前提下才有可能有重組子 |
6樓2013-08-13 09:12:29
7樓2013-08-13 12:02:57
8樓2013-08-13 14:48:52
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