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dirtyangle新蟲 (初入文壇)
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[求助]
空氣中氧化能增加由二硫鍵形成的二聚體蛋白質(zhì)的量嗎
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| 我現(xiàn)在做的蛋白是個(gè)二聚體,現(xiàn)在跑非還原電泳能看到二聚體,但是量不多,想用空氣中氧化的辦法增加二聚體的量,不知道各位大人們有知道這個(gè)方法的嗎,有沒有相關(guān)論文呢? |
蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
專家顧問 (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
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二硫鍵會(huì)在氧氣中形成,有氧催化巰基生成二硫鍵。所以要防止氧化,一是將反應(yīng)器皿放入充氮的容器,二是用碘乙酸等封閉巰基,以后再去掉。 二硫鍵的形成本身就會(huì)加快或者一定程度上改變蛋白質(zhì)的折疊構(gòu)象或者折疊過程,而不是像過去認(rèn)為的那樣,二硫鍵形成只是被動(dòng)的穩(wěn)定三維構(gòu)象。 |
版主 (著名寫手)
己所不欲,勿施于人
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我讀過有文章研究蛋白的還原態(tài), 先用DTT把蛋白所有的二硫鍵斷開, 然后過柱子除去過量DTT, 接下來為了保證Cystine不會(huì)在沒有DTT的情況下重新形成二硫鍵,就在完全無氧的情況下進(jìn)行試驗(yàn). 既然為了防止二硫鍵重新生成, 需要在完全無氧的條件下操作,想必氧氣是可以增加二硫鍵的 不過謹(jǐn)慎懷疑作用有限. 你如果想用氧氣飽和的緩沖液試下也無妨,無非就是先往緩沖液里吹10分鐘氧氣,攪拌加冒泡.我以前有這么做過,氧氣在冷水里的溶解度還是不錯(cuò)的 |

專家顧問 (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
| 如果操作時(shí)間短可以加入放映體系中以Beta-巰基乙醇或DTT,但是時(shí)間長了也不行,而且要考慮Beta-巰基乙醇或DTT可能有其他影響,尤其是后期要是用凝膠電泳進(jìn)行染色的話,Beta-巰基乙醇可能對(duì)一些染料會(huì)有影響(比如銀染有時(shí)可能會(huì)受到影響),染色前最好用超濾去掉,那時(shí)離心機(jī)最好在封閉的充氮環(huán)境中運(yùn)行。 |
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