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我要吃西瓜金蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
PCR特異性問(wèn)題求助
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如題，最近在做分子克隆，根據(jù)一段序列設(shè)計(jì)了引物，使用反轉(zhuǎn)錄出來(lái)的cDNA作為模板，但是結(jié)果一直很不理想 做了一下溫度梯度進(jìn)行PCR，結(jié)果還是這樣，求幫忙分析 一共是3對(duì)引物 marker使用的是DS2000 左右兩邊各位marker，中間每三個(gè)為一個(gè)溫度，每個(gè)溫度從左到右產(chǎn)物長(zhǎng)度分別是400+，600+，200+ [ Last edited by 我要吃西瓜 on 2013-9-28 at 12:45 ] |
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ndsc
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2013-09-30 17:07:55
我要吃西瓜: 金幣+3, ★有幫助 2013-10-01 06:16:22
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我要吃西瓜: 金幣+3, ★有幫助 2013-10-01 06:16:22
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我認(rèn)為擴(kuò)增成這樣已經(jīng)挺好了，你的目的是什么？？ 肯定是得到目的片段啊，現(xiàn)在應(yīng)該做的不是優(yōu)化擴(kuò)增體系，而是在現(xiàn)有的最好體系中回收目的片段。 有些時(shí)候做實(shí)驗(yàn)就是這樣，有些本末倒置，回收好相應(yīng)片段后回收純化，濃度夠的克隆或直接測(cè)序，不夠的二擴(kuò)一次接著克隆測(cè)序，效率很關(guān)鍵的，有結(jié)果才是最終目的，剩下的只是浮云。 |
9樓2013-09-30 17:05:49
2樓2013-09-28 13:25:54
hl16010921
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2013-09-28 16:22:55
我要吃西瓜
金蟲(chóng) (初入文壇)
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4樓2013-09-28 22:11:56
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