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candy845木蟲 (正式寫手)
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[求助]
關于pcr的幾個問題，請教大家，先謝謝了！
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我投的一篇文章外審意見回來了，實驗中涉及到用realtime pcr 檢測幾個基因的相對定量變化，用ddct的方法，內(nèi)參是GAPDH，編輯給了如下的意見： 1. There is no mention of any assessment of RNA quality, either of its integrity or purity (ie the absence of inhibition). 2. Furthermore, agains all well-published evidence, the authors use a single, unvalidated reference gene to normalise, showing quite marginal differences in mRNA levels in Figure 3. There is a huge body of literature that shows very clearly that this kind of analysis is misleading and inappropriate. 4. it has also been well-known since 1998, when ABI published the details of the DDCq method, that the PCR efficiencies of both genes of interest and reference genes must be known, as otherwise this method of analysis is invalid. 問題1是因為我怕文字太多而沒寫； 之后的問題就不懂了，我用的GAPDH在以往的研究中很常用啊？還有問題3也搞不懂了。問題4是要測擴增效率么？ 請高手不吝賜教！謝謝。 |
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-10-08 21:33:14
kx444555: 金幣+3, 鼓勵交流 2013-10-08 21:33:14
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樓主你這投的是什么雜志，怎么竟然有這樣的要求。實在太奇怪了。你總不能把你提出的RNA的OD值放在文章上吧，建議樓主可以搞個只給REVIEWER看。如果樓主做的是老鼠或者人的細胞，GAPDH肯定沒問題啊，你可以ARGUE，當然同時你也做個ACTIN作對照的，這樣既顯示你的沒問題，也顯示你聽從了他的意見。問題4應該就是擴增效率，儀器一般會給出吧。 總結出來，不知道樓主發(fā)的文章是不是檢測pcr效率的，如果是一般的細胞分子生物學實驗，這個REVIEWER的意見實在是不能理解。 |
2樓2013-10-08 20:30:47
candy845
木蟲 (正式寫手)
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3樓2013-10-09 15:46:22
4樓2013-10-09 16:13:52
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