 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6477 | 回復(fù): 6 | ||||
gengpy470新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
鎳柱親和層析純化
|
| 求助各位高手，我做的是真核細(xì)胞內(nèi)純化his標(biāo)簽蛋白，做鎳柱親和層析時(shí)在流穿的部分也檢測(cè)到目的蛋白了，我的裂解液里含10mM咪唑，請(qǐng)大家?guī)臀曳治鲆幌略? |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 結(jié)構(gòu)生物學(xué) |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有59人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 親和鎳柱那個(gè)公司的好？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)蛋白純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 怎樣能得到高純度的蛋白？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- His Tag融合蛋白純化
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 組氨酸標(biāo)簽的問題
已經(jīng)有27人回復(fù)
- His標(biāo)簽的蛋白純化柱子
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 親和層析柱重生問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 關(guān)于GST親和層析的幾點(diǎn)疑惑？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于his-tag蛋白的分離和純化 微生物產(chǎn)生！文獻(xiàn)多多益善
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 融合蛋白不掛柱，急！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 進(jìn)行羥胺裂解后，進(jìn)行蛋白的二次過親和層析住純化問題！�。�！求助啊 ！�。�
已經(jīng)有9人回復(fù)
- Tris-Hcl緩沖液
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】胰蛋白酶抑制劑瓊脂糖凝膠 PTI 親和層析柱的應(yīng)用
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】Ni柱洗脫蛋白
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【分享】蛋白質(zhì)純化個(gè)人總結(jié)2
已經(jīng)有38人回復(fù)
- 包涵體變性復(fù)性
已經(jīng)有11人回復(fù)
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 642666
- 注冊(cè): 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機(jī)合成
2樓2013-11-08 15:16:56
gengpy470
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1205
- 帖子: 62
- 在線: 29.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1993251
- 注冊(cè): 2012-09-11
3樓2013-11-08 16:39:15
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 642666
- 注冊(cè): 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機(jī)合成
4樓2013-11-08 17:13:23
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 1766465
- 注冊(cè): 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 麗麗好人！ 2013-11-18 17:25:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 麗麗好人！ 2013-11-18 17:25:55
|
樓主的問題就是帶組氨酸X6標(biāo)簽的蛋白質(zhì)掛上鎳柱能力差的問題，我提示幾點(diǎn)： 1.目的蛋白質(zhì)如果在表達(dá)過程中一直處于溶解狀態(tài)的，在非變性條件下也能夠和Ni-NTA柱上得到純化。如果形成了包涵體過著其他不溶性沉淀，可在6mol/L的鹽酸胍或者8mol/LUrea中溶解后上鎳柱。對(duì)于分泌蛋白質(zhì)一般采用非變性條件純化。變性過程可以用表面活性劑。 2.純化時(shí)可采用變性條件和非變性條件，取決于目標(biāo)蛋白質(zhì)的溶解度和（His）6是否能夠暴露在蛋白質(zhì)的分子表面。如果在變性條件或者非變性條件下之一不掛柱，可改換位另一條件，并且改用別的變性劑或者表面活性劑。 大于1mmol/L的DTT會(huì)還原鎳離子而無法掛柱。 3.如果溶液中存在較高濃度的螯合劑（EDTA/ETGA等）、離子型去污劑、甘氨酸、組胺、含有NH4+離子的試劑等，都會(huì)使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱。 4.蛋白質(zhì)形成了多聚體、或者與DNA相互作用遮蔽了（His）6位點(diǎn)也會(huì)使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱。 5.目的蛋白質(zhì)折疊時(shí)形成了遮蔽了（His）6位點(diǎn)會(huì)使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱，構(gòu)建基因時(shí)（His）6可以在N末端也可以在C末端，但是要處于蛋白質(zhì)的分子表面，而且要與蛋白質(zhì)分子之間最好有一段親水序列，最好能夠引入酶切位點(diǎn)（比如凝血酶酶切位點(diǎn)）。 6.可能在樓主的實(shí)驗(yàn)條件下，被純化的蛋白質(zhì)發(fā)生了聚合，也就是遮蓋了至少一些蛋白質(zhì)分子上的組氨酸X6標(biāo)簽的，洗脫時(shí)實(shí)際上先被洗下來的不是結(jié)合在鎳柱上靠組氨酸X6標(biāo)簽與鎳離子形成配位鍵的目的蛋白質(zhì)，而是結(jié)合在鎳柱上靠組氨酸X6標(biāo)簽與鎳離子形成配位鍵的目的蛋白質(zhì)以非共價(jià)建附著的目的蛋白質(zhì)。 |
5樓2013-11-09 02:29:23
haodanfeng
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 38.9
- 帖子: 8
- 在線: 9.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2239470
- 注冊(cè): 2013-01-14
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
6樓2013-11-18 16:42:10
swani
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 124.9
- 帖子: 12
- 在線: 12.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 151154
- 注冊(cè): 2005-12-30
- 專業(yè): 病毒學(xué)
7樓2013-11-19 05:23:59
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 gengpy470 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +7 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑 +5 | niko- 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) +4 | 石能偉 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué)070300 學(xué)碩336求調(diào)劑 +5 | vv迷 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 13341 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 司空. 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 295復(fù)試調(diào)劑
+8
|
簡木ChuFront 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|