 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 6482 | 回復(fù): 6 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[求助]
鎳柱親和層析純化
|
||||
| 求助各位高手，我做的是真核細(xì)胞內(nèi)純化his標(biāo)簽蛋白，做鎳柱親和層析時在流穿的部分也檢測到目的蛋白了，我的裂解液里含10mM咪唑，請大家?guī)臀曳治鲆幌略? |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 結(jié)構(gòu)生物學(xué) |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有104人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 親和鎳柱那個公司的好？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 畢赤酵母表達(dá)蛋白純化
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 怎樣能得到高純度的蛋白？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- His Tag融合蛋白純化
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 組氨酸標(biāo)簽的問題
已經(jīng)有27人回復(fù)
- His標(biāo)簽的蛋白純化柱子
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 親和層析柱重生問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 關(guān)于GST親和層析的幾點(diǎn)疑惑？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于his-tag蛋白的分離和純化 微生物產(chǎn)生！文獻(xiàn)多多益善
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 融合蛋白不掛柱，急！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 進(jìn)行羥胺裂解后，進(jìn)行蛋白的二次過親和層析住純化問題！�。�！求助啊 �。�！
已經(jīng)有9人回復(fù)
- Tris-Hcl緩沖液
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】胰蛋白酶抑制劑瓊脂糖凝膠 PTI 親和層析柱的應(yīng)用
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】Ni柱洗脫蛋白
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【分享】蛋白質(zhì)純化個人總結(jié)2
已經(jīng)有38人回復(fù)
- 包涵體變性復(fù)性
已經(jīng)有11人回復(fù)
3樓2013-11-08 16:39:15
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時
- 蟲號: 642666
- 注冊: 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機(jī)合成
2樓2013-11-08 15:16:56
susizheng
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 130 (高中生)
- 貴賓: 0.008
- 金幣: 4738.3
- 散金: 2273
- 紅花: 56
- 帖子: 2308
- 在線: 740.7小時
- 蟲號: 642666
- 注冊: 2008-11-01
- 性別: GG
- 專業(yè): 有機(jī)合成
4樓2013-11-08 17:13:23
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 麗麗好人！ 2013-11-18 17:25:55
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+5, 麗麗好人！ 2013-11-18 17:25:55
|
樓主的問題就是帶組氨酸X6標(biāo)簽的蛋白質(zhì)掛上鎳柱能力差的問題，我提示幾點(diǎn)： 1.目的蛋白質(zhì)如果在表達(dá)過程中一直處于溶解狀態(tài)的，在非變性條件下也能夠和Ni-NTA柱上得到純化。如果形成了包涵體過著其他不溶性沉淀，可在6mol/L的鹽酸胍或者8mol/LUrea中溶解后上鎳柱。對于分泌蛋白質(zhì)一般采用非變性條件純化。變性過程可以用表面活性劑。 2.純化時可采用變性條件和非變性條件，取決于目標(biāo)蛋白質(zhì)的溶解度和（His）6是否能夠暴露在蛋白質(zhì)的分子表面。如果在變性條件或者非變性條件下之一不掛柱，可改換位另一條件，并且改用別的變性劑或者表面活性劑。 大于1mmol/L的DTT會還原鎳離子而無法掛柱。 3.如果溶液中存在較高濃度的螯合劑（EDTA/ETGA等）、離子型去污劑、甘氨酸、組胺、含有NH4+離子的試劑等，都會使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱。 4.蛋白質(zhì)形成了多聚體、或者與DNA相互作用遮蔽了（His）6位點(diǎn)也會使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱。 5.目的蛋白質(zhì)折疊時形成了遮蔽了（His）6位點(diǎn)會使得目的蛋白質(zhì)無法掛上鎳柱，構(gòu)建基因時（His）6可以在N末端也可以在C末端，但是要處于蛋白質(zhì)的分子表面，而且要與蛋白質(zhì)分子之間最好有一段親水序列，最好能夠引入酶切位點(diǎn)（比如凝血酶酶切位點(diǎn)）。 6.可能在樓主的實(shí)驗(yàn)條件下，被純化的蛋白質(zhì)發(fā)生了聚合，也就是遮蓋了至少一些蛋白質(zhì)分子上的組氨酸X6標(biāo)簽的，洗脫時實(shí)際上先被洗下來的不是結(jié)合在鎳柱上靠組氨酸X6標(biāo)簽與鎳離子形成配位鍵的目的蛋白質(zhì)，而是結(jié)合在鎳柱上靠組氨酸X6標(biāo)簽與鎳離子形成配位鍵的目的蛋白質(zhì)以非共價(jià)建附著的目的蛋白質(zhì)。 |
5樓2013-11-09 02:29:23
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +7 | 李李不服輸 2026-03-26 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑 +6 | minht 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +8 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +6 | Amber00 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +13 | 新時代材料 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分 +5 | dongfang59 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +7 | 孅華 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿 西北大學(xué) 總分282 英語一62 求調(diào)劑
+7
|
18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 26申博 +3 | 加油沖啊！ 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué) 296 求調(diào)劑 +4 | 朵朵- 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4 | 周56 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|