 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4677 | 回復(fù): 6 | ||||
顏小泡泡新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
引物設(shè)計——下游引物是否需要考慮閱讀框問題
|
|
如題，本人是分子生物學(xué)小菜鳥一枚，最近剛學(xué)習(xí)如何設(shè)計引物，非常困惑。。。 請問大家，在設(shè)計上游引物的時候，起始密碼子ATG的閱讀框是要格外注意的，不能在加完酶切位點之后把閱讀框破壞掉 那么下游引物是否需要考慮閱讀框的問題呢？如果加完下游酶切位點，閱讀框被破壞了，是否也需要補加堿基 還有，補加的堿基會不會影響目的基因所合成的蛋白質(zhì)的表達呢。。 最后一個問題，下游引物是否需要考慮加入終止密碼子呢，謝謝各位了！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 核酸生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有143人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 克隆表達 引物設(shè)計
已經(jīng)有31人回復(fù)
- 關(guān)于PCR引物中加入酶切位點的設(shè)計方法和酶切問題！ 新手，求幫忙�。�
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 設(shè)計原核表達引物時，要不要卡率移碼的問題？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- miRNA提取和引物設(shè)計，想做實時定量檢測下表達量
已經(jīng)有11人回復(fù)
- PCR引物之NcoI的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 做原核表達引物設(shè)計的有關(guān)問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 設(shè)計引物注意事項？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 引物設(shè)計區(qū)域選擇問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 大家做RT-qPCR設(shè)計引物用的什么軟件呀？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 引物設(shè)計好了怎么檢測它的特異性
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 點突變引物設(shè)計的問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 定點突變引物設(shè)計
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 兼并引物 里邊有多個兼并堿基好嗎？
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 引物設(shè)計的問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 開放閱讀框 引物設(shè)計
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】現(xiàn)要設(shè)計引物擴增后測序，無各個條件都滿足的引物，請問什么條件是最重?/a>
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】設(shè)計引物引入酶切位點，如何保證沒有發(fā)生閱讀框移碼？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【專題】引入酶切位點的引物設(shè)計問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于啟動子缺失的引物設(shè)計問題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】問大家一個設(shè)計引物對閱讀框的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 克隆基因全長引物設(shè)計問題
已經(jīng)有32人回復(fù)
2樓2013-11-10 18:17:30
顏小泡泡
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 456
- 帖子: 11
- 在線: 4小時
- 蟲號: 2570909
- 注冊: 2013-07-29
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2013-11-10 19:41:48
4樓2013-11-10 21:30:20
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
顏小泡泡: 金幣+1, ★有幫助 2013-11-13 19:46:18
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
顏小泡泡: 金幣+1, ★有幫助 2013-11-13 19:46:18
| 如果你的基因片段是完整的基因片段就不會有啟動子和終止子不用再加。如果是ORF，那么就要就要加上終止子。PCR擴增出來的啟動子之前的片段如果沒有構(gòu)成明顯的破壞原來的SD sequence（比如與SD sequence明顯的堿基配對二級結(jié)構(gòu)的引物序列），或者構(gòu)成的全新的SD sequence緊隨其后會有新的位點適當(dāng)?shù)谹TG位點出現(xiàn)，那么在原核細胞中表達應(yīng)該沒有問題，一般不會引起閱讀框的改變。如果是在真核細胞中表達，則引物不要破壞原來的5'-UTR sequence和3'-UTR sequence就一般不會引起閱讀框的改變。 |
5樓2013-11-10 22:53:14
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
6樓2013-11-10 22:55:43
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
顏小泡泡: 金幣+1 2013-11-13 19:46:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
顏小泡泡: 金幣+1 2013-11-13 19:46:24
|
你擴增整個基因的目的是什么？如果是表達的話，要看是用native的啟動子，還是用特定的啟動子。如果用現(xiàn)有的表達載體做過表達的話，啟動子終止子的序列都在表達載體上了，你不需要考慮的。如果你要用基因本身的啟動子表達，做克隆的時候當(dāng)然要包括啟動子序列。如果你想用其它啟動子表達，則需要單獨克隆。 做基因表達時，設(shè)計下游引物是否帶終止密碼子要看你是否克隆到C端帶標(biāo)簽的表達載體上。如果C端有標(biāo)簽融合，就需要設(shè)計引物到終止密碼子前。如果C端不帶tag，引物中要有終止密碼子。 |
7樓2013-11-11 02:20:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 顏小泡泡 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +5 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +11 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 15/750 |
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境總分308求調(diào)劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +3 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +6 | 梁茜雯 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +8 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 086500 325 求調(diào)劑 +3 | 領(lǐng)帶小熊 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)家禽遺傳育種課題組2026年碩士招生（接收計算機專業(yè)調(diào)劑） +3 | 123阿標(biāo) 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿]
申請回稿延期一個月，編輯同意了。但系統(tǒng)上的時間沒變，給編輯又寫郵件了，沒回復(fù)
 10+3
|
wangf9518 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|