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wqertyre至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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求教，融合蛋白表達(dá)條件怎么優(yōu)化的 已有1人參與
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| 最近剛剛構(gòu)建好一段基因，在bl21里面表達(dá)，分子量大小估計(jì)有70KD，我想優(yōu)化一下表達(dá)條件，包括IPTG的濃度、誘導(dǎo)時(shí)間，還有溫度，本來(lái)想設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)的，可看了幾篇中文文獻(xiàn)，怎么都沒(méi)做正交試驗(yàn)?zāi)�？是沒(méi)必要嗎？還是太難做了？坐等大神賜教 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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wqertyre: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-16 23:21:38
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依我的經(jīng)驗(yàn)，蛋白是否表達(dá)，表達(dá)量高低幾乎都只與蛋白本身有關(guān)。溫度，iptg，誘導(dǎo)時(shí)間點(diǎn)通常只是在已有的基礎(chǔ)上提高表達(dá)量。 不知道你的蛋白已經(jīng)表達(dá)出來(lái)了沒(méi)，如果表達(dá)不出來(lái)通常就是要選取表達(dá)某一片段進(jìn)行表達(dá)；如果表達(dá)出來(lái)的話，可以通過(guò)降低溫度延長(zhǎng)時(shí)間獲得可溶性表達(dá)蛋白的量。 |
2樓2013-12-06 09:28:08
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5樓2014-04-22 23:39:18
6樓2014-04-23 15:07:18
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8樓2014-04-24 20:29:22
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9樓2014-04-24 20:30:27
【答案】應(yīng)助回帖
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wqertyre: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-05-03 10:50:18
wqertyre: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-05-03 10:50:18
| 現(xiàn)在做的比較好了。誘導(dǎo)濃度0.1和0.5mM都沒(méi)有太大區(qū)別。我做個(gè)8個(gè)對(duì)照。誘導(dǎo)濃度做過(guò)1.左右的，覺(jué)得還是0.3到哦，6比較好。不過(guò)最重要的還是你的菌，你的轉(zhuǎn)化，建議每次做的時(shí)候，菌株都要重新轉(zhuǎn)化，因?yàn)槲业闹亟M菌株保菌后，蛋白表達(dá)量下降很多。保菌甘油濃度控制第一點(diǎn)。溫度是37攝氏度，這個(gè)師兄之前做過(guò)20.25.30都做過(guò)。希望給你幫助，少走彎路，加油 |
10樓2014-04-29 11:30:39
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