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tmoonday金蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌基因組DNA抽提 用異丙醇沉淀很多
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小蟲最近抽細(xì)菌總DNA遇到問(wèn)題了，望各位大神指導(dǎo) 1用經(jīng)典的酚氯仿異戊醇抽提DNA，酚氯仿異戊醇25：24:1混合兩次，第二次中間沒(méi)有太多蛋白，后氯仿異戊醇再混合一次，吸上清加0.6-0.7的異丙醇沉淀（-20℃），12000rpm離心10min發(fā)現(xiàn)有很多沉淀，70%乙醇洗滌后，沉淀不變，烘干后成白色，加dd水不容易溶，需要放到37℃放置一段時(shí)間才能溶。 2用NANODROP 測(cè)DNA濃度時(shí)，A260/A230在1.0-1.2左右，最高峰不是在260nm，靠近230，A260/A280在1.8-2.1左右 3跑瓊脂糖膠的時(shí)候膠孔處有殘留，抽出來(lái)的DNA不能被酶切（Bam I，EcoR I,Hind III,都試過(guò)酶切了12h以上） 請(qǐng)問(wèn)這是出了什么問(wèn)題，最近抽了好多次都是這個(gè)狀況，實(shí)驗(yàn)室其他人員也是這個(gè)情況，偶爾也有抽的較好的，如圖二。 最近快瘋了，因?yàn)橐ɑ蚪M文庫(kù)，試劑盒抽的太淡了。跪求大神指導(dǎo)�。。�！ 圖一異常的DNA.jpg 圖二（前面是抽i的有問(wèn)題的DNA，后面是正常的DNA）.jpg 圖三BamI,EcoRI,Hind III酶切.jpg |
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tmoonday
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