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檸檬可樂(lè)星新蟲 (小有名氣)
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轉(zhuǎn)化之后復(fù)蘇感受態(tài)細(xì)胞能用加了氨芐的LB培養(yǎng)基嗎？ 已有3人參與
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我看師姐做的是把連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞之后，加入800ul 不加氨芐的LB培養(yǎng)基，然后37℃搖菌1h。 我想問(wèn)的是這一步為什么不能用加了氨芐的LB培養(yǎng)基呢？這樣不是還可以防止雜菌的生長(zhǎng)嗎？ 第一次做克隆，有些步驟的原理還不是很清楚。求高手指點(diǎn)！ |
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是不應(yīng)該加的。 熱激就是讓菌體瞬間熱脹，表面蛋白掉下來(lái)形成通道，質(zhì)粒才能進(jìn)去，這個(gè)過(guò)程對(duì)細(xì)菌是有傷害的。菌體42度熱激之后很脆弱。另外熱激時(shí)會(huì)死一部分細(xì)菌，死掉的細(xì)菌會(huì)裂解，釋放出一些蛋白酶什么的，對(duì)活著的細(xì)菌也不太好。用不加抗生素的LB37度溫浴是為了讓還活著的細(xì)菌更好的復(fù)蘇。如果加了抗生素會(huì)增加細(xì)菌復(fù)蘇時(shí)的負(fù)擔(dān)。但是溫浴的時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，一般以半個(gè)小時(shí)到一個(gè)小時(shí)之間為宜。 |
4樓2013-12-13 11:44:45
gyesang
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