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菜菜0929

木蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 急�。�！這種基因克隆需不需要用RACE

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序后篩選出差異基因，克隆這樣的基因需要用RACE技術(shù)嗎？

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你所浪費(fèi)的今天是昨天死去的人所奢望的明天，你所厭惡的現(xiàn)在是你回不去的曾經(jīng)，活在當(dāng)下

1樓 2013-12-29 20:59:05

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lxj341401

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引用回帖:

6樓: Originally posted by 菜菜0929 at 2013-12-30 10:33:11
我剛才看了一下，你能不能幫我判斷一下我這樣的流程正不正確？
第一步，把轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的其中一個(gè)差異基因序列輸入OFR finder，的到了一個(gè)長(zhǎng)的OFR
2.把得到的這個(gè)OFR的氨基酸序列放到NCBI Conserved domains檢 ...

流程沒(méi)問(wèn)題，我認(rèn)為根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)引物就好了。確保萬(wàn)一的話你就設(shè)計(jì)兩對(duì)引物好了，測(cè)序的一對(duì)，NCBI上得到的同源序列，哪個(gè)能P出來(lái)用哪個(gè)。

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7樓2013-12-30 11:40:09

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菜菜0929: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-12-30 10:20:34

RACE是利用兼并引物P出一段序列，然后向兩端延伸獲得全長(zhǎng)序列的方法。
你轉(zhuǎn)錄組都測(cè)序了克隆基因就不需要用RACE了。

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2樓2013-12-29 21:09:45

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引用回帖:

2樓: Originally posted by lxj341401 at 2013-12-29 21:09:45
RACE是利用兼并引物P出一段序列，然后向兩端延伸獲得全長(zhǎng)序列的方法。
你轉(zhuǎn)錄組都測(cè)序了克隆基因就不需要用RACE了。

那我用什么方法？我看人家博士論文有用race的，我導(dǎo)師也讓我用�？墒俏椰F(xiàn)在研三，沒(méi)發(fā)文章沒(méi)數(shù)據(jù)，也沒(méi)有克隆過(guò)基因，我怕來(lái)不及畢業(yè)。有簡(jiǎn)單的方法給我提供一個(gè)，萬(wàn)分感謝

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3樓2013-12-29 21:58:01

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-12-30 08:23:01

根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和分析結(jié)果設(shè)計(jì)引物，從cDNA克隆你要的基因的完整ORF

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菜菜0929

4樓2013-12-30 04:16:11

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