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lwk5716鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
關(guān)于PCR擴(kuò)不出的問(wèn)題，求大神解答 已有5人參與
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大家好：我現(xiàn)在PCR的時(shí)候遇到了一個(gè)問(wèn)題，我根據(jù)小麥轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的結(jié)果，想設(shè)計(jì)幾對(duì)引物做熒光定量，擴(kuò)增長(zhǎng)度大約100bp左右。但是，我想先用基因組DNA，用普通的PCR儀摸一下條件，卻怎么也擴(kuò)不出目的帶（只有模糊的引物帶），用touchdown程序也不行。用cDNA直接熒光定量更是定不出來(lái)，可我設(shè)計(jì)引物的時(shí)候都盡量避開(kāi)了引物二聚體或者錯(cuò)配，這是咋回事��？求大神解答，著急啊 |
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lvbobo823
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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5樓2014-01-24 19:46:39
冰封之real
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8樓2014-01-26 09:29:32
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2樓2014-01-24 15:46:37
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3樓2014-01-24 19:04:10
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4樓2014-01-24 19:04:39
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6樓2014-01-24 22:41:19
gyesang
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實(shí)際上你是拿RNA為模板來(lái)設(shè)計(jì)引物，產(chǎn)物長(zhǎng)度為100bp，你有看過(guò)你設(shè)計(jì)的引物在基因組序列上的位置嗎，萬(wàn)一它們跨內(nèi)含子而使PCR產(chǎn)物變得很長(zhǎng)，而你擴(kuò)增不出來(lái)是你延伸時(shí)間不夠?qū)е碌?br />
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lwk5716
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lwk5716
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